【摘 要】
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目的将纳米脂肪(Nanofat)注射至紫外线诱导的光老化裸鼠皮下,观察裸鼠真皮厚度及微血管密度,皮肤内细胞增殖情况,并定期取材观察纳米脂肪的吸收情况,初步探讨纳米脂肪改善光
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目的将纳米脂肪(Nanofat)注射至紫外线诱导的光老化裸鼠皮下,观察裸鼠真皮厚度及微血管密度,皮肤内细胞增殖情况,并定期取材观察纳米脂肪的吸收情况,初步探讨纳米脂肪改善光老化裸鼠皮肤质地的作用机理,为纳米脂肪在临床中应用于皮肤光老化的治疗提供相关的客观证据。方法1、紫外线UVB以一定距离照射裸鼠背部皮肤,摸索最小红斑量(Minimal Erythemal Dose,MED)。分2组(n=6),空白组和UVB照射组。UVB组在测得的MED能量密度基础上,连续UVB照射,6次/周,8周后比较两组大体观及组织学HE染色、Masson染色。2、用侧孔孔径为5mm的抽脂针抽吸得到颗粒脂肪(Macrofat),侧孔孔径为1mm的抽脂针抽吸得到微小颗粒(Microfat),将微小颗粒脂肪经三通管机械乳化,再用0.5mm孔径滤网过滤得到纳米脂肪(Nanofat)。三种脂肪进行大体观比较,Calcein-AM荧光染色镜下性状比较,纳米脂肪干细胞分离培养。3、选用6-8周雌性BALB/c裸鼠27只,按照不同的处理方法分为4组:Normal组(不行任何干预),PBS组(紫外线照射+PBS注射),ADSCs组(紫外线照射+ADSCs注射),Nanofat组(紫外线照射+nanofat注射,4周取材)。注射4周后对皮肤取材:肉眼观察各组裸鼠皮肤质地;HE和Masson染色分别观察裸鼠皮肤结构、真皮层的厚度和胶原纤维的排列情况;免疫组织化学CD31,Ki67染色观察皮肤微血管及细胞增殖情况;抗人核抗体免疫荧光染色检测皮肤中是否有人源细胞存留;同时Elisa检测皮肤再生相关生长因子。另制备一组9只光老化动物模型,注射纳米脂肪与PBS,分别在2,4,6,8周取材动态观察纳米脂肪吸收情况。结果1、裸鼠的最小红斑量为160mJ/cm~2,UVB照射2周后,肉眼观察个别裸鼠背部皮肤开始脱屑,照射8周后裸鼠皮肤变粗糙并且细纹增多,HE染色显示紫外线照射后皮肤表现呈现光老化组织学特征,Masson染色显示UVB照射组真皮平均厚度变薄。2、镜下观察纳米脂肪中大部分脂肪细胞结构被破坏,局部仍可看到散在的完整的脂肪细胞,纳米脂肪分离培养可见脂肪干细胞形态类似的细胞贴壁、成活、增殖。3、注射纳米脂肪4周后,在皮肤大体观上:Nanofat组,ADSCs组与PBS组相比未见明显差异。Masson染色显示真皮厚度:Nanofat组,ADSCs组,均较PBS组真皮厚(P<0.05),ADSCs组比Nanofat组真皮厚(P<0.05)。CD31染色计算真皮微血管密度:Nanofat组和ADSC组,均较PBS组微血管密度高(P<0.05),ADSCs组与Nanofat组间微血管密度无差异。Ki67染色计算增殖指数:Nanofat组、ADSCs组比PBS组表皮细胞增殖大(P<0.05),各组在真皮细胞增殖上无差异。抗人核抗原染色显示Nanofat组皮下未见人源性细胞存在,Elisa检测纳米脂肪中含有与皮肤再生相关的生长因子,如VEGF、EGF、bFGF、TGF-β、IGF、IL-6等。动态观察纳米脂肪吸收情况可见:纳米脂肪注射至光老化裸鼠皮下逐渐吸收,8周时,纳米脂肪基本吸收完全。结论纳米脂肪中含有ADSCs及多种皮肤再生相关生长因子,脂肪组织结构被破坏。其具有促进光老化皮肤真皮增厚、微血管密度增加及表皮细胞增殖的作用,将其注射在光老化裸鼠皮下被逐渐吸收,8周时基本吸收完全。
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