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目的:白血病(leukemia)是一类起源于造血骨髓干细胞的恶性程度较高的肿瘤,随着化疗方案的逐步完善,缓解率明显升高,甚至治愈,但由于耐药问题的出现,其复发率较前也呈明显的升高趋势。miRNA作为一种内源性非编码单链RNA,其长度为21～25个核苷酸,主要通过与对应靶基因的3’端非编码端结合,对细胞行为进行调控,即在转录后水平对靶基因的表达进行调控。目前关于miR-132在K562及Jurkat细胞株的表达水平及作用机制的研究极少。为了探讨miR-132对白血病细胞增殖、凋亡的影响及相关作用机制,并为白血病的靶向治疗提供更多有效依据,故设计本实验。方法:1.鉴定miRNA-132的过表达交由生物公司(上海吉玛公司)合成miRNA-132 mimics序列以及与人类基因序列无同源性的阴性对照序列(NC序列)。通过以Lipofectamine 2000为介导的脂质体转染法,将miRNA-132 mimics以及NC序列分别转染至白血病K562 及 Jurkat 细胞中;通过实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法检测转染后K562及Jurkat细胞中miR-132的表达水平,对Lipofectamine 2000为介导的脂质体转染效率进行鉴定。2.miRNA-132 mimics转染K562及Jurkat后细胞增殖、凋亡的改变采用CCK-8法绘制miRNA-132过表达后K562及Jurkat细胞生长曲线,流式细胞术检测转染后对各细胞株增殖及细胞凋亡的情况。3.检测转染后miRNA-132转染K562及Jurkat细胞恶性细胞行为相关因子通过qRT-PCR检测sirtuins家族基因SIRT1及肿瘤抑制基因P53的表达情况;通过Western-Blot法进一步检测转染前后SRIT1及乙酰化P53蛋白表达量的变化。4.统计学分析采用SPSS22.0软件进行统计学分析,以P<0.05表示差异有统计学意义,计量数据以均数±标准差表示。组间差异采用LSD-t检验,多组间比较均使用单因素方差分析(One-way ANOVA分析)。结果:1.实时荧光定量PCR结果显示,与空白对照组相比,转染miR-132 mimics组K562及Jurkat细胞内miR-132表达水平明显升高,SIRTI mRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),而P53 mRNA表达无特异性变化,其改变不具有统计学意义(P>0.05);转染阴性序列组K562及Jurkat细胞内miRNA-132表达水平、SIRT1及P53 mRNA表达水平均未见明显变化,其差别均不具有统计学意义(P>0.05)。这表明通过转染有效的提高了 miRNA-132在K562及Jurkat细胞中的表达,同时下调SIRT1 mRNA的表达,而miRNA-132的高表达对抑癌基因P53的表达无明显影响。2.CCK-8结果显示:转染miR-132 mimics组K562及Jurkat细胞,与阴性对照组及空白对照组相比较,转染组细胞的增殖能力受到明显抑制,其差别均有统计学意义(P<0.05)。3.流式细胞术结果显示:转染miR-132 mimics组K562及Jurkat细胞细胞凋亡率较空白对照组均有显著升高,其差别均有统计学意义(P<0.05),而转染阴性序列组细胞凋亡率较空白对照组无显著变化,其差别均不具有统计学意义(P>0.05)。表明高表达的miR-132能抑制K562及Jurkat细胞的增殖。4.Western Blot法检测各实验组SRIT1及乙酰化P53蛋白表达水平变化可知,在K562及Jurkat细胞中,转染组(miR-132 mimics组)与空白对照组相比,SIRT1蛋白表达量均降低,降低约61.0%及47.3%,各组差别均具有统计学意义(P<0.05),同时转染组与空白对照组相比,乙酰化P53蛋白表达量均升高,升高约53.6%及62.6%,其差别均有统计学意义(P<0.05),阴性对照组(miR-132-NC组)组中SIRT1蛋白表达量与空白对照组比较均无明显差异,不具有统计学意义(P>0.05)。本实验结果与qRT-PCR结果相符,表明高表达的miR-132有效抑制K562及Jurkat细胞中SIRT1蛋白的表达;而乙酰化P53蛋白表达量的升高,表明SIRT1蛋白的低表达有利于P53的乙酰化,加强其抑癌效应。结论:miRNA-132的高表达可以抑制白血病K562及Jurkat细胞株的增殖,并促进其凋亡,其机制可能与激活SRIT1/P53通路有关。