露地菊品种组培体系的建立及转F3’H基因的研究

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类黄酮3’-羟化酶(F3’H)是由二氢堪非醇合成花青素途径中的第一个关键酶,催化二氢堪非醇生成紫红色花青素(即矢车菊色素,cyanidin),使花瓣和果实的颜色呈现紫红色。本研究利用从依光型津田芜菁和非依光型赤丸芜菁中克隆的F3’H基因,通过Gateway技术构建非抗生素标记的植物表达载体,利用该载体及已经构建的抗生素标记的植物表达载体遗传转化露地菊,以期改变露地菊的花色,为创建露地菊花色新品种奠定研究基础。主要研究结果如下:(1)利用Gateway技术构建pCAMBIA1301-PMI-F3’H植物表达载体,经PCR和酶切验证后,将验证正确的载体电转化农杆菌EHA105后,通过PCR验证表明pCAMBIA1301-PMI-F3’H植物表达载体成功转入农杆菌EHA105中。(2)通过对外植体的消毒处理及体外培养,成功建立了露地菊‘神韵’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’茎段外植体的无菌再生体系;通过双因素完全随机试验确定了各个品种NAA与6-BA的最佳配比,建立了叶片外植体再生体系。(3)利用含有植物表达载体pH7WG2D-F3’H和pCAMBIA1301-PMI-F3’H的农杆菌遗传转化露地菊不同品种,在预培养1天,农杆菌(OD600值为0.5)侵染10min,24-26℃黑暗条件共培养2天,延迟筛选2天,潮霉素浓度和甘露糖浓度分别为5mg/L和12g/L的筛选条件下遗传转化露地菊‘火焰’叶片外植体后成功获得了再生植株。经PCR检测表明,潮霉素筛选获得转津田芜菁F3’H基因的再生植株为4株、转赤丸芜菁F3’H基因的再生植株为4株,甘露糖筛选获得转津田芜菁F3’H基因的再生植株为1株、转赤丸芜菁F3’H的再生植株为1株。对露地菊‘神韵’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’进行遗传转化后获得了部分抗性芽。
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