拮抗细菌RY3对柑橘绿霉病菌拮抗活性及机理研究

来源 :上海师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangdong1231
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对于前期从土壤中筛选的一株高活性拮抗细菌RY3,通过菌体形态、生理生化特性测定并结合16SrDNA序列分析,表明该菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。本论文对RY3发酵培养基组分和发酵条件进行优化,研究抑菌物质粗提物的理化性质和抑菌机理,为RY3抑菌物质生防应用奠定基础。平板对峙法测得菌株RY3具有广谱抗真菌性,对柑橘绿霉病菌(Penicillium digitatum)、柑橘青霉病菌(Penicillium expansum),桃褐腐病菌(Monilinia fructicola),柑橘蒂腐病菌(Diplodia natalensis),冬枣浆胞病菌(Alternaria Nees ex Wallr.),灰霉病菌(Botrytis cinerea)均有较好的抑制作用,其中对柑橘绿霉病菌抑制作用最佳。采用单因素和正交试验设计,通过摇瓶发酵对其发酵培养基组分和发酵条件进行优化,结果显示,最优培养基为:可溶性淀粉1%,黄豆饼粉0.5%,碳酸氢铵1%,碳酸钙0.5%;最优培养条件为:转速180r/min,接种量2%,装液量125ml/250ml,初始pH值7~7.5,温度34℃,最佳培养时间28h。优化条件下对RY3发酵培养,采用酸沉淀法提取其抗菌物质,得到RY3抗菌粗提物,其对柑橘绿霉病菌孢子萌发抑制率为96.92%。为探讨RY3抗菌粗提物理化性质及机理,研究热处理、pH值、紫外线照射、有机试剂和蛋白酶对其稳定性的影响,结果显示,抗菌粗提物具有较强的耐热、耐有机试剂、耐酸、耐紫外线照射稳定性,对胰、胃蛋白酶和蛋白酶K不敏感,但pH值较高会使其失活。摄像显微镜观察结果表明,粗提物处理后绿霉病菌孢子萌发时间大大推迟,且萌发后芽管肿大;绿霉病菌菌丝出现消融、断裂,分枝增多,扭曲变形,胞内物质凝集。渗透势实验发现粗提物处理使绿霉病菌细胞膜遭受破坏,透性增大,胞内蛋白和糖大量渗漏。
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