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利用细胞生物学、细胞工程及分子生物学技术系统地研究了人白细胞间素2(IL-2)的细胞生物学及分子生物学,制备了一组生物学特性多样化的抗IL-2单克隆抗体(McAb),对IL-2及其McAb的实验室和临床应用也进行了探讨,主要取得了以下结果: 一、探讨了与建立稳定的IL-2生物活性测定体系有关的若干问题:在解决了IL-2依赖株细胞冻存和复苏困难的问题的同时,又建立了以大鼠脾脏母细胞(RB)为基础的IL-2测活方法,弥补了依赖株和小鼠脾脏母细胞测活方法中的缺陷。建立了一个稳定、有效的、以依赖株方法为主,RB方法为辅的IL-2生物学活性测定体系。 二、系统研究了人扁桃体淋巴细胞(TLC)和Jurkat细胞系产生IL-2的细胞学基础,实现了IL-2超诱导制备,最大制备滴度可达3,000u/ml。对超诱导制备的机制也进行了探讨。 三、研究了Jurkat细胞克隆化的促进因素;经连续克隆化,筛选,建立了稳定、高产的IL-2分泌株,JurkatⅡ-3。其产生IL-2的水平与国外报道的水平相一致,最大分泌活性可达3,000u/ml。 四、利用聚合酶链反应(PCR)技术和引进的IL-2cDNA构建了IL-2表达质粒,并实现了重组IL-2在大肠杆菌中的高效表达(占总菌体蛋白的30%),保证了IL-2的来源。 五、建立了一套适用于无糖基化重组淋巴因子及小分子多肽的高效价免疫制备抗蛋白多肽McAb的方法。对杂交瘤制备中的免疫、筛选及克隆化等环节中的有关技术进行改进,提高了杂交瘤细胞系制备的效率,减轻制备工作的强度。 六、研究了确定McAb亲和力的方法。设计了快速确定McAb在检测或亲和色谱中用途的亲和指数测定方法,有助于杂瘤细胞系鉴定早期对细胞系的正确舍取。 七、制备了一组在抗原表位特异性、亲和力及生物功能(中和活性)上表现为多样化的抗IL-2 McAb,并首次获得抗IL-2 C端的McAb。确定了抗天然及重组IL-2的McAb,为IL-2的基础及应用研究提供了有效的工具。 八、建立了以多价抗体及McAb为基础的夹心排阻ELISA,用以快速确定McAb的构象表位特异性,并可用于蛋白质的构象分析。这一方法省去对待测McAb逐一标记的步骤,简易、可靠。 九、用McAb研究了IL-2及其改构体的功能域及抗原性。确定IL-2与其受体结合位点与IL-2 N端相关,并取决于IL-2构象。用McAb分析、描述的IL-2构象分布与报道的用X线晶体衍射技术所描述的结果基本吻合。抗原性分析表明:IL-2有几个显型和隐型决定基,显型决定基主要分布在IL-2的N、C端及中区。对IL-2第125位半胱氨酸的突变并不改变IL-2的抗原性,这些改构体在临床上应用的安全性可能也较大。 十、利用抗天然IL-2 McAb建立了染色IL-2分泌细胞的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫染色法。用于确定IL-2分泌细胞的频数和分布,并可替代、补充IL-2