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喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，目前治疗以手术治疗、放射治疗和化学治疗为主，但复发、转移率仍较高，晚期疗效差，需积极探讨新的治疗方法。 自九十年代以来，肿瘤基因治疗已成为最引人瞩目的研究领域，是继手术、放疗、化疗、免疫治疗之后的第5种模式。而自杀基因疗法是目前有效治疗肿瘤中最有前景的基因治疗策略之一。HSV-tk基因作为自杀基因的突出代表，其开放读框由起始密码子AUG至终止密码子UGA，共1128个核苷酸，所编码的HSV-tk酶能够催化许多核苷类似物(如ACV、GCV、BVdU等)的一磷酸化，然后进一步使之二磷酸化及三磷酸化。所形成的药物三磷酸毒性分子，可以抑制DNA并竞争性的掺入细胞DNA链中，使DNA链破碎，杀死细胞。本实验在我们以往研究的基础上，进行了以下研究，以期为喉癌的治疗寻找一条新的、有效的途径。 1．重组逆转录病毒载体pLXSN-tk在质脂体介导下，转导PA317包装 第四军医大学硕士学位论文细胞，G418筛选抗性克隆并扩大培养。用NIH3T3细胞测定病毒滴度，筛选出滴度大于 1石 XIO‘／ml的重组病毒产生细胞系。 2．将重组病毒感染人喉癌细胞 HepZ，筛选出 G4抗性细胞克隆，命名为Hep士／tk。通过PCR及RTPCR检测鉴定，从mRNA水平证明tk基因已成功整合到靶细胞染色体DNA中并有tk的高表达，对转导细胞生长状况进行观察发现：tk基因转导对喉癌细胞的增殖能力无显著性影响。 3．将Hep－2／tk与Hep－2细胞按不同比例混合，接种于96孔极培养，24h后加入 GCV使终浓度为 SHg／ttil，常规培养 6天后测定细胞存活率，结果显示HepZ／tk细胞占20％时，细胞存活率为47％，而Hep工／tk比例为40％－100％时细胞存活率均在20％以下。 4．裸鼠皮下接手 IX 10‘／0．lml Hep－2八k、Hep－2／0及 HeP－2细胞，第 8天开始腹腔注射GCV治疗60m吵g，2次／d人连续测量肿瘤结节的大小，第20天处死裸鼠并称量瘤重。肉眼观察肿瘤局部大体形态。结果显示，HepZ／tk组肿瘤体积及瘤重均显著小于空白对照组Hep2及空载体对照组HCp2／0中＜0．05L而空白对照组与空载体对照组之间无显著差异中＞0．05人 上述研究表明：HSVtk／GCV自杀基因系统对荷人喉癌裸鼠有显著的抑瘤作用，有望成为治疗喉癌的有效策略。