Mg-1Mn颌面骨修复材料体外降解与细胞生物学性能研究

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目的:1、研究Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料生物体外腐蚀降解行为,探讨其耐腐蚀降解机制。2、研究Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料对骨髓间充质干细胞的细胞毒性和成骨分化能力。方法:1、采用浸泡腐蚀研究方法,检测Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料体外腐蚀降解性能。将Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料分别浸泡于模拟体液(SBF溶液)1、3、5、10和20天,使用分析天平检测材料腐蚀浸泡前后质量变化规律,使用扫描电子显微镜(SEM)观察材料腐蚀浸泡后表面形貌特征,并使用能谱仪检测腐蚀产物元素组成。2、间接法检测大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)活性。根据GB/T 16886.5-2017标准,制备Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料浸提液,使用DMEM-F12培养基,配置4组浸提液浓度(100%、75%、50%、25%)的细胞培养液,使用CCK-8试剂盒检测不同浸提液浓度下BMSCs活性。3、成骨相关基因Col I m RNA检测。基于前期细胞活性实验研究结果,选择浓度25%Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料浸提液的培养基添加成骨诱导液后培养BMSCs 7天,使用实时定量PCR技术检测目标基因Col I m RNA的表达情况。培养BMSCs 21天,茜素红染色观察矿化结节的沉积。结果:1、Mg-1Mn镁合金颌面骨修复材料经SBF溶液浸泡后,第1天至第5天降解速率呈明显的下降趋势,5-10天呈现一个稳定的降解速率,至20天降解时间结束,降解速率极小。平均腐蚀降解速率为0.0042 mm/年。2、SEM结果显示:Mg-1Mn合金表面发生了明显的点蚀,刚开始为小的凹坑,随着时间的增长,基体表面的腐蚀凹坑相连逐渐变大形成深坑,第10天、20天时,均观察到腐蚀严重的合金表面,未发现腐蚀形貌有随着时间的增加而发生明显变化的现象。表明浸泡至20天时逐渐形成的薄膜保护镁合金基体防止其进一步腐蚀。3、流式细胞术结果显示:分离培养的第三代细胞表达CD29(99.93%),CD90(99.97%)呈阳性;CD45(1.31%)呈阴性,与所报道BMSCs表型相符。4、CCK-8法检测结果显示:细胞与4组浸提液(100%、75%、50%、25%浓度)共培养1、3天时,25%Mg-1Mn合金浸提液的细胞毒性为1级,符合生物医用材料的标准规定。从第5天起,细胞毒性均高于1级,但25%Mg-1Mn合金浸提液对细胞的增殖的抑制影响一直保持最小。5、q RT-PCR结果显示:25%Mg-1Mn合金浸提液组细胞的Col I的m RNA相对表达呈明显上调趋势。6、茜素红染色结果显示:25%Mg-1Mn合金浸提液组矿化结节染色面积更大。结论:(1)Mg-1Mn合金具备较为优异的耐腐蚀降解性能。(2)Mg-1Mn合金在SBF溶液中发生了明显的点蚀,前10天,随着时间的增长,基体表面的腐蚀凹坑深度不断增加。在10-20天时,Mg-1Mn合金处于一个缓慢稳定的腐蚀降解状态。(3)25%Mg-1Mn合金浸提液对BMSCs的细胞活性的抑制影响最小。(4)25%Mg-1Mn合金浸提液对BMSCs的成骨能力有促进作用。
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