【目的】1．建立生物检材中6种常用苯二氮卓药物的联合分析方法。2．建立氯硝西泮在大鼠体内急性中毒模型；研究氯硝西泮在大鼠体内的含量分布情况，获得其在急性中毒情况下体内分布规律和重要毒理学数据。3．研究氯硝西泮在大鼠模型各脏器和部分体液中的分布规律及特点，为相关案件检材的采集、保存、处理、检测、死因判定等法医学鉴定提供了相关的科学依据；同时也为安神类中成药品中是否违法添加氯硝西泮提供简便、可靠的分析方法。【方法】1．分析方法的建立：待测生物样品碱化后，以乙酸乙酯为萃取溶剂进行液-液萃取，气相色谱法（GC）进行检测。色谱条件：HP-5弹性石英毛细管柱；氮磷检测器（NPD）；柱温：程序升温，初始温度200℃，保持1min，以20℃/min的升温速率升至270℃，再以5℃/min速率升至280℃，保持4min；进样口、检测器温度均为280℃；分流进样，分流比为5:1；载气：高纯氮气，总流量：27mL/min，柱流量：4.2mL/min；空气流量：60mL/min；氢气流量：2.2mL/min；尾吹气流量：30mL/min。进样量1μL。2．定性、定量分析：利用气相色谱法进行联合分析,通过标准品的保留时间（tR值）定性。配制地西泮、硝西泮、氯硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑的混合标准溶液，确定各目标分析物的tR值及出峰顺序。配制氯硝西泮的标准工作系列溶液，以氯硝西泮的浓度为横坐标(X)，出峰时峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得到回归方程Y=aX+b，用于生物检材中氯硝西泮浓度的定量分析。3．分布研究：12只雄性SD大鼠，随机分成两组：实验组与对照组各6只。实验组大鼠以LD50（大鼠LD50为2000mg/Kg）灌胃氯硝西泮溶液；对照组大鼠灌胃等量生理盐水，观察各组大鼠行为表现，30min后大鼠均给予颈椎脱臼处死，室温条件下立即解剖采集心血、尿液、心、肺、肝、脾、肾、后肢肌肉、脑，分别检测其中氯硝西泮的含量。对照组大鼠作为相应的空白对照。各毒理学数据经统计处理后得出氯硝西泮在大鼠体内的分布规律。【结果】1．检测结果：在所建立的气相色谱分析方法中，得到6种苯二氮卓类药物的出峰顺序依次为：地西泮、硝西泮、氯硝西泮、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑，内源性物质对检测无干扰。血、尿、肝中氯硝西泮的定量分析的线性范围分别为1.0-80.0μg/mL、1.0-80.0μg/mL、1.0-80.0μg/g(S/N≥3)，线性关系良好。最低检出限为血液0.2μg/mL、尿液1.0μg/mL、肝脏1.0μg/g。加样平均回收率数据均在97.5%-103.2%之间，日内、日间相对标准偏差均小于10%。2．中毒症状：实验组大鼠灌胃给药后10min开始出现精神躁动、抽搐、肌肉震颤等症状，10min后逐渐表现安静，无方向感，步态不稳，后肢肌张力增强，共济失调，无疼痛反应，30min后未死亡。对照组未见明显异常。3．体内含量分布情况：实验结果显示，氯硝西泮广泛存在于急性中毒大鼠体内，在各脏器和体液中的分布特点为：肺﹥肝﹥心﹥肾﹥脾﹥脑﹥肌肉﹥心血﹥尿液。【结论】1．本实验建立的气相色谱分析方法可以同时测定多种常见苯二氮卓药物。该方法样品前处理过程简便，检测快速、准确、可靠，实用性强，适用于法医毒物分析及临床急救事件。2．经口灌胃急性染毒大鼠体内氯硝西泮含量的分布以含血量丰富和脂肪含量高的脏器如肺、肝、心等组织为主，尿液中含量最低。3．本实验结果提示：对于疑似氯硝西泮滥用致死的案件，法医可以选取肝脏、肺脏、肾脏等药物含量较高的脏器以及选取血液作为定性、定量鉴定的检材，选取尿液作检材时检测目标分析物应以氯硝西泮代谢物为主。本实验建立的分析方法及分布研究对今后的法医鉴定工作提供了有效的实践依据。同时，本实验也为相关苯二氮卓类药物进一步分析检测提供了一定的参考依据。