【摘 要】
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利用分子标记在室内对作物品种的真实性和纯度进行鉴定,具有鉴定周期短、不受季节和气候条件限制、省工省地等特点,在新品种审定、种质资源保护、市场监督管理等方面得到了广泛应用,已成为辅助水稻田间种植鉴定的有效技术手段。DNA提取材料的优化是品种真实性分子标记鉴定体系中的关键步骤。鉴于叶片组织较幼嫩、易破碎等优势,传统的DNA提取一般以叶片为材料,但要获取叶片须将种子经催芽到进一步生长成可供取样的幼苗,所
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利用分子标记在室内对作物品种的真实性和纯度进行鉴定,具有鉴定周期短、不受季节和气候条件限制、省工省地等特点,在新品种审定、种质资源保护、市场监督管理等方面得到了广泛应用,已成为辅助水稻田间种植鉴定的有效技术手段。DNA提取材料的优化是品种真实性分子标记鉴定体系中的关键步骤。鉴于叶片组织较幼嫩、易破碎等优势,传统的DNA提取一般以叶片为材料,但要获取叶片须将种子经催芽到进一步生长成可供取样的幼苗,所需时间较长。本论文研究了以种子为材料用试剂盒法提取DNA的可行性,以期利用种子提取DNA应用于快速、高效鉴定品种真实性,在此基础上利用原农业部行业标准(NY/1433-2007)中推荐的24对SSR引物,对江西省近年来审定的77个水稻品种真实性指纹图谱进行构建,旨在为今后江西省种子管理和农业行政执法提供快速鉴定水稻种子品种的途径和依据,利用图谱中品种分子差异特性辅助DUS测试加强对品种资源的保护提供技术支撑。研究的主要结果如下:1.研究了以种子为材料利用试剂盒法提取水稻基因组DNA的可行性,比较分析了种子、糙米和叶片材料提取DNA的浓度和纯度,结果显示三种材料提取的DNA总体浓度与纯度均较高,虽有少量RNA残留,但碳水化合物、多肽等污染物较少。选用2对SSR引物RM267和RM274对三种材料提取的DNA进行PCR扩增琼脂糖凝胶电泳,结果表明种子和叶片材料扩增结果带型显色清晰明亮,但糙米材料的扩增结果部分缺失。实验研究发现利用种子为材料采用试剂盒法能提取到较高质量的基因组DNA,满足品种真实性鉴定中PCR扩增的要求。2.使用24对SSR引物构建了77个江西省近年审定水稻品种的指纹图谱。24对引物共检出103个等位基因,每个引物平均检出4.29个等位基因,最高检出7个等位基因;共扩增出了155种条带类型,其中17个品种在标记引物上表现出了特异带型。结果显示实验使用的24对SSR引物在77个水稻品种上表现出较丰富的多态性,但部分水稻品种也表现出异质程度不高的情况,反映出现阶段地区品种可能存在同质化问题。3.对77个水稻品种进行了ntsys聚类分析,结果遗传相似系数在0.62-1.00之间,大部分水稻品种间的遗传亲缘关系较近,其中甬优6715和甬优6763为籼粳交三系杂交稻,金优207为籼型三系杂交稻与其他两系水稻品种在聚类树图上能明显区分开。部分品种要明确鉴定可以使用《NY/T 1433-2014水稻品种鉴定技术规程SSR标记法》中的48对引物提高鉴别效果或参考田间性状表现加以区分。
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