【摘 要】
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牛肝菌是一大类种类繁多,分布广泛的大型真菌。其研究主要集中于子实体的营养成份、菌丝的液体发酵、药用价值、生态维护、人工驯化等方面。牛肝菌的生理代谢、生长发育机理研究薄弱,因而人工驯化研究进展缓慢。除个别种外,牛肝菌仍然不能人工培养,纯培养仅停留于菌丝生长阶段,不会发育成原基及子实体,不能完成生活史。本实验室研究的砖红绒盖牛肝菌,已能在纯培养条件下诱导出原基,因此本文利用核磁共振技术并结合代谢组学相
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牛肝菌是一大类种类繁多,分布广泛的大型真菌。其研究主要集中于子实体的营养成份、菌丝的液体发酵、药用价值、生态维护、人工驯化等方面。牛肝菌的生理代谢、生长发育机理研究薄弱,因而人工驯化研究进展缓慢。除个别种外,牛肝菌仍然不能人工培养,纯培养仅停留于菌丝生长阶段,不会发育成原基及子实体,不能完成生活史。本实验室研究的砖红绒盖牛肝菌,已能在纯培养条件下诱导出原基,因此本文利用核磁共振技术并结合代谢组学相关分析软件对砖红绒盖牛肝菌不同生长阶段的菌丝、原基、子实体组织块三个重要时期的差异代谢产物进行了定性定量分析,以期找到调控原基的特征性小分子化合物,为今后利用这些物质进行砖红绒盖牛肝菌的人工驯化提供理论依据。本文的主要研究内容及结果如下:1.提取溶剂:分别以水、甲醇、丙酮、氯仿、水+甲醇(1:1)、水+丙酮(1:1)、水+氯仿(1:1)、水+甲醇+氯仿(1:1:2)作为溶剂,进行了对比试验,结果表明,水提取出来的化合物种类较多。2.代谢产物指认:对不同生长阶段(8天、16天、35天)及不同发育时期(菌丝体、原基、子实体)的水溶性代谢产物的核磁一维氢谱进行了指认,共指认出化合物47种,其中氨基酸类24种;胺类及氨类化合物4种;有机酸6种;糖类4种;核酸类2种;醇类有3种。3.差异化合物分析:分别收集成熟的新鲜子实体、纯培养8天、16天、35天的子实体组织块、菌丝、原基、培养基,两两对比分析发现:(1)子实体组织块:显著性差异代谢产物有:异亮氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、乙酰胆碱、4-氨基丁酸、胱硫醚、胆碱、甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、乙二醇、甘露醇、胆胺、尿苷,绝大部分呈下降的趋势,其中海藻糖、乙二醇、胆胺在第8天,4-氨基丁酸在第16天,甜菜碱在第35天的含量降到零。(2)菌丝体萌发:与初始子实体相比,菌丝萌发及生长过程中产生了如下显著性差异代谢产物:别异亮氨酸、缬氨酸、异丁酸、异亮氨酸、赖氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、乙酰胆碱、4-氨基丁酸、胱硫醚、谷氨酸、胆碱、甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、乙二醇、甘露醇、胆胺、尿苷、半胱氨酸,绝大部分呈下降的趋势,其中别异亮氨酸、异丁酸、胱硫醚在第8天,乙酰胆碱、乙二醇、半胱氨酸在第16天,异亮氨酸、谷氨酸、胆胺在第35天含量降到零。(3)菌丝体生长:在第8天、16天、35天菌丝体生长三个阶段,产生了如下显著性差异代谢产物:异亮氨酸、4-氨基丁酸、赖氨酸、丙氨酸、甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、乙二醇、甘露醇、甘氨酸、胆胺、尿苷等,绝大部分呈下降的趋势,其中赖氨酸、丙氨酸、乙二醇、甘氨酸从第8天到16天,4-氨基丁酸、赖氨酸、丙氨酸、乙二醇、甘氨酸、胆胺从第8天到35天含量降到零。(4)原基萌发:与初始子实体相比,原基萌发及生长过程中产生了如下显著性差异代谢产物:异亮氨酸、缬氨酸、异丁酸、异亮氨酸、丙氨酸、精氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、乙酰胆碱、胱硫醚、胆碱、甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、乙二醇、甘露醇、胆胺,到第8天,原基刚开始生长时,初始子实体中的异亮氨酸、精氨酸、脯氨酸、乙二醇、胆胺含量降为零,而异丁酸、谷氨酰胺、甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、甘露醇含量极显著上升。到第16天及35天,也有这种趋势。(5)原基生长:在第8天到16天,产生了如下显著性差异代谢产物:2-羟基丁酸、异丁酸、丁二酸二甲酯、精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、4-氨基丁酸、谷氨酸、天冬酰胺、胆碱、葡萄糖、海藻糖、甘露醇,且含量均显著下降,其中2-羟基丁酸、天冬酰胺、葡萄糖、海藻糖在16天降为零;从第8天到35天,产生了如下显著性差异代谢产物:别异亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、缬氨酸、异丁酸、丁二酸二甲酯、丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、乙酰胆碱、甜菜碱、葡萄糖、甘露醇、尿苷,且含量均显著下降,而甜菜碱则在35天时降为零。(6)菌丝体与原基:培养第8天,原基和菌丝体的显著差异代谢产物有别异亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甜菜碱、葡萄糖、甘露醇、胆胺、尿苷,除胆胺仅菌丝体含有外,其它均为原基中含量高于菌丝体,且原基中新出现了别异亮氨酸和谷氨酸;16天,显著差异代谢产物为甜菜碱、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、胆胺和尿苷,除胆胺外,其它均为原基中含量高于菌丝体;35天,显著代谢产物有缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、甜菜碱、葡萄糖、甲醇、海藻糖、甘露醇、尿苷,趋势跟上面一样,且原基中出现了新的代谢产物甲醇。(7)培养基:显著性差异代谢产物有胆碱、葡萄糖、甲醇、海藻糖、甘露醇、蔗糖,除葡萄糖和胆碱外,培养第8天,出现蔗糖;培养第16天,出现甲醇、海藻糖、甘露醇。本文对纯培养条件下砖红绒盖牛肝菌不同培养阶段、不同生长发育时期的代谢产物进行了系统的定性定量分析,这是本文的亮点或创新点。
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