【摘 要】
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目的:研究膝关节骨性关节炎患者关节软骨中Lnc RNA HOTAIR含量与正常人的相比表达是否存在差异,并探究HOTAIR的表达在IL-1β介导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的作用。方法:取因膝骨性关炎（OA）于我院行全膝关节置换术（TKA）患者的膝关节内侧髁软骨作为实验组（OA组）,取无关节炎患者的关节软骨作为对照组（Nor组）,通过RT-PCR分析两组关节软骨中lnc RNA HOTAIR的表
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目的:研究膝关节骨性关节炎患者关节软骨中Lnc RNA HOTAIR含量与正常人的相比表达是否存在差异,并探究HOTAIR的表达在IL-1β介导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的作用。方法:取因膝骨性关炎（OA）于我院行全膝关节置换术（TKA）患者的膝关节内侧髁软骨作为实验组（OA组）,取无关节炎患者的关节软骨作为对照组（Nor组）,通过RT-PCR分析两组关节软骨中lnc RNA HOTAIR的表达差异;建立骨关节炎大鼠动物模型（oa组）,根据取材时间分为4W组,6W组,8W组,分析在骨关节炎大鼠（oa组）和正常大鼠（nor组）的关节软骨中lnc RNA HOTAIR是否存在的差异,并进行组内比较,分析nor组、4W组、6W组、8W组关节炎模型大鼠的关节软骨中HOTAIR的表达差异趋势;培养大鼠软骨细胞,使用IL-1β对大鼠软骨细胞进行刺激,研究Hotair在软骨细胞中变化,进一步明确Hotair是否可通过IL-1β的刺激达到过表达的目的。实验设计Con组、IL-1β组,si-Hotair组以及IL-1β+si-Hotair组,分别代表空白对照、加入IL-1β进行干预、加入Hotair基因的si RNA进行干扰、以及加入IL-1β和si-Hotair共同进行干预。实验通过CCK-8法和流式细胞技术,明确Hotair基因的表达是否会影响IL-1β介导软骨细胞的活力和凋亡水平。实验通过Westernblot法测定不同实验组Ⅱ型胶原蛋白的表达量,明确Hotair基因是否受IL-1β影响,进一步干扰软骨细胞外软骨基质合成。结果:1.人的软骨实验表明,与Nor组相比,OA组HOTAIR的表达量明显上调。动物实验表明,和人软骨实验相同,oa组Hotair表达比nor组也存在上调,且随着造模时间的的变化,Hotair的表达量出现上升趋势。2.为了明确Hotair是否受IL-1β影响,实验设计con组和IL-1β组,结果显示,IL-1β组Hotair表达量上调。3.通过CCK-8实验,结果显示,与Con组相比,IL-1β组导致大鼠关节细胞活力减弱,si-Hotair组,大鼠关节软骨细胞活力无明显变化。与IL-1β组相比,IL-1β+si-Hotair组关节软骨细胞活力增强。4.通过流式细胞术实验表明,与Con组相比,IL-1β组细胞凋亡水平明显增加,si-Hotair组与之相比无明显差别;与IL-1β组相比,IL-1β+si-Hotair组细胞凋亡水平明显下降。5.通过Westernblot法,实验结果显示,与Con组相比,IL-1β组Ⅱ型胶原蛋白表达下调,si-Hotair组Ⅱ型胶原蛋白表达无明显变化;与IL-1β组相比,IL-1β+siHotair组显示Ⅱ型胶原蛋白表达增加。结论:膝关节炎关节软骨中的HOTAIR的表达含量上调,而这种调节可以通过IL-1β介导。Hotair的表达上调可受IL-1β调控,使得关节软骨细胞活力减弱、凋亡增加、Ⅱ型胶原蛋白表达降低,而干扰了Hotair后,IL-1β介导的软骨细胞活力细胞活力增强、凋亡降低,Ⅱ型胶原蛋白表达增加;说明Hotair是关节炎发生发展的重要因素,在IL-1β介导的关节炎中,Hotair可作为其下游通路发挥其负面效应。
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