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本实验应用RT-PCR技术将河南地方分离株A/Chichen/HN43/98(H9N2)的HA、NA基因片段反转录成cDNA，然后对HA、NA基因的上、下游引物进行磷酸化，以cDNA为模板扩增HA、NA基因，再用T4 DNA 聚合酶处理HA、NA扩增片段。处理用于克隆的质粒载体：用限制性内切酶SapⅠ切开质粒载体pPolⅠSapⅠT，Klenow大片段酶补平，小牛碱性磷酸酶移去5’末端磷酸基团。在T4 DNA连接酶作用下，将处理过的线性载体pPolⅠSapⅠT分别与上述HA、NA基因的cDNA进行体外连接，筛选出阳性重组子pPolⅠHA T、pPolⅠNA T。将pPolⅠHAT、pPolⅠNAT质粒与转染系统的6个转录质粒pPolⅠPAT、pPolⅠPB1T、pPolⅠPB2T、pPolⅠNPT、pPolMⅠT、pPolⅠNST以及4个蛋白质表达重组质粒pcDNA3.0-PA、pcDNA3.0-PB1、pcDNA3.0-PB2、pcDNA3.0-NP共转染293T细胞，然后用转染后的细胞培养液接种9-11日龄SPF鸡胚，收获其尿囊液测的得HA效价为4log2，再经SPF鸡胚连续传3代，HA效价上升至8log2。经血清学及分子生物学方法鉴定，证实了H9N2亚型禽流感病毒的重组成功。本试验以河南地方分离株A/Chichen/HN43/98（H9N2）作为HA、NA基因片段的捐赠株，应用反向遗传技术成功地重组了一株HNP/03（H9N2）亚型禽流感病毒株，不仅为进一步研究H9N2亚型禽流感地方株的毒力变异机制及相关的生物学功能奠定了基础，也为改造和培育优良的禽流感疫苗株提供了可借鉴的模式。