目的：采用化学合成的小分子干扰RNA（siRNA）转染小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞，观察CR16mRNA和蛋白表达情况，筛选出CR16-siRNA的有效干扰序列，为后续的实验提供研究基础。方法：在TM4有内源性表达CR16的基础上，针对小鼠CR16mRNA靶序列设计三段不同的CR16干扰序列（si-CR16序列1、2、3），通过荧光标记的siRNA（cy3-CR16-siRNA）确定最佳转染浓度后，在脂质体Lipofectamine2000介导下分别用三段si-CR16序列转染TM4细胞，设立空白对照组（未转染）、试剂对照组（加Lipofectamine2000）和阴性对照组（转染阴性siRNA序列，N-controlsiRNA）。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western-Blot技术分别检测转染后48h各组细胞CR16mRNA和72h蛋白的表达情况，确定si-RNA的最优干扰序列。结果： TM4细胞内源性表达CR16。Cy3-siRNA转染TM4细胞后，20nM组可见微弱的红色荧光，随着转染浓度的增加，表达红色荧光的TM4细胞增多，以50nM和100nM最为明显，根据实验有效性和节约性原则，选定50nM作为CR16-siRNA的有效转染浓度。三种si-CR16序列转染TM4细胞48h后，CR16mRNA相对表达量均较空白对照组显著下降（P<0.01），以si-CR16序列作用最明显，而si-CR16序列1和si-CR16序列2组间比较CR16mRNA表达无明显改变（P>0.05）。结论：成功筛选出针对CR16mRNA靶序列的有效干扰序列si-RNA3，荧光转染筛选出最优转染浓度50nM，且RNA干扰后CR16蛋白和mRNA表达均降低。目的研究CR16和N-WASP在空白组、试剂组、阴性对照组和干扰组TM4细胞中的定位及定量表达，进一步探讨二者的相关性及在支持细胞功能中的作用。方法采用免疫细胞化学法、免疫荧光双标、WB（western blot）和逆转录-聚合酶链反应（reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR）检测CR16蛋白和N-WASP蛋白共表达情况，检测CR16mRNA、N-WASPmRNA和Arp2/3mRNA在TM4细胞中的表达情况。结果荧光双标结果显示CR16和N-WASP二者共表达于睾丸支持细胞中，主要表达在支持细胞胞浆、胞膜及细胞间连接处。RNA干扰后CR16的表达明显弱于空白组，随着时间延长，这种干扰作用更明显。RNA干扰后CR16mRNA表达72h(0.2468±0.034)和48h(0.0986±0.026)的细胞组弱于24h(0.2856±0.032)组，72h和24h间差异无统计学意义（P>0.05），24h与48h和72h比较有显著性差异（P<0.01）。干扰组各个时段三种mRNA表达与空白组比较均有显著性差异（P<0.01）。同一种mRNA在干扰后不同时段比较，CR16mRNA48h和72h差异有统计学意义（P<0.05），48h干扰组CR16mRNA的表达(0.0986±0.026)显著弱于空白组、且对应的N-WASPmRNA表达(0.1896±0.028)、Arp2/3mRNA的表达(0.2088±0.035)也显著弱于空白对照组（1.000±0.001）（P<0.01）。Arp2/3mRNA48h(0.2088±0.035)和72h(0.2357±0.042)差异有统计学意义（P<0.05），24h(0.3248±0.029)分别与48h和72h有显著性差异（P<0.01）。Western Blot结果与三种mRNA表达变化基本一致，也呈现良好的时效关系，转染后48h蛋白和mRNA表达均达到最佳抑制水平。免疫荧光双标显示CR16与N-WASP以复合物形式共表达于小鼠睾丸支持细胞。结论RNA干扰组CR16表达水平显著降低，对应的N-WASP和Arp2/3表达与CR16相一致。免疫细胞化学结果表明CR16蛋白在RNA干扰后48h低表达，推测可能与支持细胞活动被抑制有关，其蛋白表达水平同mRNA水平相一致。免疫荧光双标结果进一步证实CR16与N-WASP以CR16/N-WASP复合物形式表达于睾丸支持细胞中。目的研究CR16RNA干扰后支持细胞形态和功能的变化，初步探讨CR16与精子发生的相关性。方法采用HE染色、R250细胞骨架染色和透射电镜（TEM）方法，观察各组支持细胞大体结构和细胞骨架的改变，免疫荧光观察微管蛋白的表达变化。结果空白组、试剂组、阴性序列组和干扰组HE染色形态无明显变化，镜下可见支持细胞形态完整。但R250细胞骨架染色发现与空白组相比，试剂组、阴性序列组和干扰组细胞骨架发生变化，细胞间连接断裂比较多，胞质内可见大量空泡，电镜下显示处理组有较多脂滴和自噬泡，内质网肿胀，微管微丝断裂，干扰组核质浓缩，核膜粗糙，细胞表面突起基本消失。微管蛋白荧光显示CR16干扰后，微管蛋白表达下降，尤其是胞体细胞间连接处，但胞质微管蛋白表达无明显改变，空白组、试剂组和NC序列组微管蛋白表达无明显改变。结论干扰组支持细胞骨架结构破坏严重，细胞连接处微管蛋白表达显著下降，提示CR16正常表达对于维持正常支持细胞骨架有重要作用。推测CR16低表达可能通过降低支持细胞细胞骨架蛋白actin，Arp2/3的聚合作用，进而影响支持细胞的形态和功能，使精子发生过程异常（尤其是后期精子成熟和精子的迁移运动）。