目的：本研究通过β-甘油磷酸盐处理牛主动脉平滑肌细胞，建立细胞水平的体外血管钙化模型，借此观察多种非胶原类骨基质蛋白钙化期间的表达、分泌情况，以及细胞增殖、细胞凋亡／死亡情况，初步探讨其可能的机制。此外，加用氟伐他汀进行干预，观察其对体外血管钙化的影响并探讨可能的作用机制。 方法：（1）第一部分：组织块法原代培养牛主动脉中膜平滑肌细胞。选用8代以内的传代细胞，添加终浓度为10mmol／L β-甘油磷酸盐培养10天诱导钙化；利用Von Kossa染色、茜素红-S染色及检测细胞层钙沉积对钙化进行鉴定，同时观察细胞层碱性磷酸酶活性和培养上清骨钙素含量。（2）第二部分：采用噻唑兰（MTT）比色试验、台盼兰排斥试验观察不同浓度β-甘油磷酸盐对牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响，利用流式细胞分析术观察钙化期间细胞凋亡、细胞周期的情况。（3）第三部分：体外血管钙化期间，添加终浓度为10^-6、10^-7、10^-8mol/L氟伐他汀进行干预，检测细胞层钙沉积、碱性磷酸酶活性和培养上清骨钙素含量，观察氟伐他汀对钙化的影响；利用RT-PCR、Western blot方法检测正常培养细胞、钙化组及氟伐他汀治疗组的骨桥蛋白、骨连接素基因、蛋白水平的表达情况。 结果：（1）β-甘油磷酸盐处理10天后，光镜及电镜显示培养细胞出现广泛分布的钙盐沉积，Von Kossa、茜素红-S钙染色均呈阳性，细胞层钙沉积升至正常对照的28.44倍，较实验初增加了293倍（P＜0.01），从而证实体外血管钙化模型建立成功。（2）β-甘油磷酸盐能够时间依赖性增加细胞层钙沉积，细胞层碱性磷酸酶活性、培养上清骨钙素含量也随时间的延长而增高，各时间点均高于正常对照（P＜0.01）；此外，RT-PCR、Western blot证实钙化组的骨桥蛋白mRNA及蛋白表达明显增高，而骨连接素mRNA及蛋旱巨域修斗腕协士学位公义 幻县白表达略有下降。o)p－甘油磷酸盐能以时间、浓度依赖性抑制牛主动脉平滑肌细胞增殖，并且钙化组的MTT光密度值、活细胞计数与正常对照相比，实验第 4天起己有明显差异（HO．01）；④ 钙化组的细胞凋亡率随时间的延长而呈增多趋势，并与细胞层钙沉积有相关性（r＝0．9，HO．05）。（5）细胞周期分析显示，钙化组G；期细胞略有增加，S期细胞减少，G。M期细胞改变不明显，细胞增殖指数k 下降。（6）氟伐他汀能够剂量依赖性减少细胞层钙沉积，以 10－‘mo l／［。浓度组最为明显，使细胞层钙沉积减少了 27％（HO．05入 门） 应用氟伐他汀后，细胞层碱性磷酸酶活性改变不明显，但培养上清骨钙素含量显著下降（HO．05）；RT－PCR、Western blot分别从基因、蛋白水平证实骨桥蛋白表达下降、骨连接素表达增加。 结论：＊)卜甘油磷酸盐能在短时间内诱导出牛主动脉平滑肌广泛钙化，是一种良好的体外血管钙化模型。（2）体外血管钙化期间，多种非胶原类骨基质蛋白的表达、分泌发生改变，提示血管钙化类似骨矿化，是一个主动、可调控的过程。（3）体外血管钙化期间，平滑肌细胞增殖明显受抑制，死亡细胞增多，并有少量细胞凋亡，凋亡率与钙化程度相关，提示凋亡可能参与了钙化过程。山 体外血管钙化能够影响细胞周期，使G1期细胞增多，预示成熟、有合成能力的细胞相对增多八5)首次证实氟伐他汀能够减轻体外血管钙化程度，提示氟伐他汀可用于体内血管钙化的治疗。（6）氟伐他汀能够影响非胶原类骨基质蛋白如骨连接素，骨桥蛋白、骨钙素的表达或分泌，可能通过转变细胞表型、影响细胞功能而干预钙化。（7）首次证实卜甘油磷酸盐能够下调骨连接素的表达，提示其诱导钙化的能力可能与之有关。