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原生殖细胞(PGCs)是胚胎生殖干细胞(EG)的前体细胞,体外培养后可以获得具有多向分化能力与无限生殖能力的EG细胞。猪EG细胞是研究哺乳动物配子发生、早期胚胎发育、生殖谱系分化的理想实验模型,对现代生物医药研究及畜牧繁殖育种等有重要的意义。到目前为止,人们尚未建立稳定传代的猪EG细胞培养体系。影响猪EG细胞建系效率的因素很多,本研究分析了血清替代品及生长因子对猪EG细胞培养的影响效果。另外,对来源于27天和35天猪胚胎分离的原生殖细胞(PGCs)的遗传印迹状况进行了检测。结果显示:(1)血清替代品获得的猪EG细胞的原代集落数与三代集落效率和干细胞级胎牛血清无明显区别,但显著高于普通胎牛血清;(2)BIO与SCF,LIF,FGF生长因子的联合应用不仅显著提高了24天猪PGCs原代培养中的增殖能力,而且还导致三代培养中更高的集落形成效率,显著高于BIO单用或与LIF因子组合及三因子本身合用的效果。(3)BIO与SCF,LIF,FGF因子的联合应用显示出逆转EG细胞分化状态的能力。(4)27天猪PGCs构建的克隆胚胎和体外培养获得的EG细胞集落均显示了PEG10基因SNP位点的双等位基因表达,而35天PGCs构建的克隆囊胚和EG细胞集落为该位点的单等位基因表达,提示27天猪原生殖细胞发生了PEG10基因的去甲基化。(5)来源于雌性与雄性猪胚胎的PGCs经核移植技术获得的克隆胚在PEG10基因SNP位点上检测到的印迹状态一致,表明PEG10印迹基因的去除是广泛的。本研究探讨影响猪EG细胞建系因素及猪原生殖细胞的遗传印迹状态,为猪ES细胞的应用奠定了一定的理论基础。