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目的:研究茶多酚(TP)对原代牙周膜细胞(PDLC)的增殖作用;建立SD大鼠牙周炎模型,观察TP对大鼠牙周炎模型的作用。材料和方法:1.材料:原代培养人PDLC获得PDLC株,波形丝蛋白(Vimentin)、角蛋白(Keratin,CK)、DAB购自武汉博士德生物有限公司,SP试剂盒购自福州迈新生物科技有限公司,TP购自杭州天诚药业有限公司,LPS购自上海基星生物科技有限公司(产自Sigma公司),ALP试剂盒购自美国Synermed公司,人Ⅰ型胶原蛋白ELISA试剂盒购自上海西塘生物科技有限公司(产自美国SBA公司),SD大鼠购自浙江大学动物中心。2.方法:分体内和体外实验。用实验用PBS液配制不同浓度的TP水溶液,用盖玻片+酶消化组织块法培养原代PDLC,第三代细胞进行细胞鉴定,以第四代PDLC为体外药效的实验模型,用LPS刺激PDLC,分别通过MTT法,观察不同浓度下的TP水溶液对PDLC的增殖和LPS的抑制作用;通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察TP对PDLC的分化作用;通过ELISA法检测TP作用于PDLC后,Ⅰ型胶原纤维蛋白含量的变化。以结扎丝结扎牙周、注射激素并高糖饮食,建立的SD大鼠实验性牙周炎症为体内药效的实验模型,通过组织切片HE染色观察牙周组织形态学的变化,初步探讨TP对牙周炎症的作用。3.结果:TP对PDLC有增殖作用,且成浓度依赖性(p=0.00):5ug/ml,10ug/ml,50ug/ml,100ug/ml和200ug/mlTP水溶液与对照组相比较能促进PDLC的增殖,200ug/ml作用效果最好(p=0.00),300 ug/ml时细胞增殖率下降(p=0.00),TP作用于PDLC,24h即可起作用,且24h与48h无时间差异(p=0.05)。LPS对PDLC有抑制作用,有浓度依赖性(p=0.00)和时间依赖性(p=0.017),200ug/mlTP水溶液对LPS刺激PDLC48h后的炎症有显著的抑制作用(p=0.04,p=0.019)。ALP活性测定及Ⅰ型胶原纤维蛋白含量测定结果表明:TP作用于PDLC后24h,能提高PDLC的分化能力,且呈浓度依赖性(p=0.005),200ug/ml效果最好。24h和48h比较,p=0.07,无统计学意义。TP随着浓度的增加和时间的延长,Ⅰ型胶原纤维蛋白含量增加,PDLC经LPS刺激后,TP对其有显著的抑制作用,TP能有效抑制LPS对牙周Ⅰ型胶原纤维蛋白的破坏,TP对PDLC作用48h效果较24h好(p=0.003,p=0.001)。TP对实验性牙周炎模型的疗效:2mg/ml浓度的水溶液,能缓解实验性牙周炎模型的牙周破坏,促进牙周膜的再生,对牙周炎有一定的治疗作用,可以作为牙周炎治疗的辅助性药物。4.讨论与结论:TP水溶液可以促进PDLC的增殖、体外分化,促进牙周组织中Ⅰ型胶原纤维蛋白含量增加。24h,200ug/ml浓度的TP水溶液效果最好。TP水溶液可以抑制LPS对PDLC的破坏,促进Ⅰ型胶原纤维蛋白的增加。TP水溶液作用于经LPS刺激的PDLC48h,其抑制效果最好。牙周结扎、牙周激素注射及高糖饮食是一种有效、可靠、稳定的建立牙周炎症动物模型的方法。饮水2mg/mlTP对SD大鼠的实验性牙周炎模型辅助治疗的作用,可缓解牙周炎症的破坏,有促进牙槽骨重建及牙周膜修复的趋势。