目的1.建立氯胺酮依赖模型,观察氯胺酮注射剂量及注射持续时间对大鼠条件性位置偏爱(conditioned place preference, CPP)的影响,以及乙醇对不同剂量氯胺酮诱导大鼠CPP的影响。2.采用ELISA定量分析方法,检测各实验组和对照组大鼠相关脑区多巴胺(Dopamine, DA)的含量。对实验数据进行统计学分析,阐明氯胺酮注射剂量及注射持续时间对大鼠相关脑区DA的影响水平,以及乙醇对氯胺酮诱导大鼠相关脑区DA的影响水平。探讨乙醇对氯胺酮诱导大鼠相关脑区DA的影响产生作用的机制。方法1.实验动物分组、CPP实验和脑区DA检测将72只大鼠随机分为生理盐水对照组(N组12只)、乙醇灌胃对照组(E组12只)、氯胺酮注射组(K组24只)、氯胺酮注射乙醇灌胃组(KE组24只)4个大组。生理盐水对照组分为注射30天组(N1组)和注射60天组(N2组)。乙醇灌胃对照组分为乙醇灌胃30天组(E30组)、乙醇灌胃60天组(E60组)。氯胺酮注射组分为30mg/kg氯胺酮注射30天组(K130组)、30mg/kg氯胺酮注射60天组(K160组)、60mg/kg氯胺酮注射30天组(K230组)、60mg/kg氯胺酮注射60天组(K260组)。氯胺酮注射乙醇灌胃组分为30mg/kg氯胺酮注射与乙醇灌胃30天组(K1E30组)、30mg/kg氯胺酮注射与乙醇灌胃60天组(K1E60组)、60mg/kg氯胺酮注射与乙醇灌胃30天组(K2E30组)、60mg/kg氯胺酮注射与乙醇灌胃60天组(K2E60组)。N1组、N2组大鼠按15mg/kg体重的剂量经腹腔注射生理盐水,每天给药1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。E1组、E2组大鼠按2mL/kg剂量以20%的乙醇水溶液灌胃,每天给药1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。K130组、K160组大鼠按30mg/kg剂量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。K230组、K260组大鼠按60mg/kg剂量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。K1E30组、K1E60组大鼠按2mL/kg剂量以20%的乙醇水溶液灌胃5min后按30mg/kg剂量腹腔注射1Omg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。K2E30组、K2E60组大鼠按2mL/kg剂量以20%的乙醇水溶液灌胃5min后按60mg/kg剂量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次间隔24h,连续给药30天、60天。生理盐水对照组、氯胺酮注射组、氯胺酮注射乙醇灌胃组大鼠于末次给药24h置于鼠博士动物行为学分析系统中,按操作方法进行CPP实验后15min处死；乙醇灌胃对照组末次给药24h后处死。所有大鼠对照其脑区分布图谱,按分组进行解剖,分离出所需脑区组织,经处理后按所建立的ELISA分析方法用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算其中DA含量,并采用SPSS软件对定量分析结果进行统计学分析。结果1.实验大鼠的CPP效应与生理盐水对照组相比,氯胺酮注射组及氯胺酮注射乙醇灌胃组的条件性位置偏爱效应均有显著性差异(P<0.05)。与K130组相比,K1E30组伴药箱停留时间明显延长,存在显著性差异(P<0.05)；随着注射持续时间的延长,K160、K1E60的CPP效应出现消退,K1E60组与K160组相比,伴药箱停留时间增多,但差异性不明显(P>0.05)。与K230组相比,K2E30组伴药箱停留时间明显减少,有显著性差异(P<0.05)；但随着注射持续时间的延长,K260组、K2E60组的CPP效应出现消退,K2E60组与K260组相比,伴药箱停留时间减少,但差异性不明显(P>0.05)。2. ELISA定量分析方法按ELISA实验方法,以DA系列标准溶液的浓度与OD值进行曲线性回归,结果表明相关系数γ=0.9995,检测范围0.156ng/ml-10ng/ml,灵敏度为0.039ng/ml,适用于大鼠脑区中DA含量的检测。3. ELISA测定各组相关脑区DA含量(1)在前额叶皮质中,同N1相比,E30组大鼠前额叶皮质中DA含量升高,无显著差异性(P>0.05),随着持续给药时间的延长,相较于E30组,E60组DA含量升高,有显著性差异(P<0.05)；K130组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K160组DA含量相较于K130组明显增高,同N1相比,具有显著性差异(P<0.01)；K1E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.01),随着给药时间的延长K1E60组DA含量较K1E30组降低,与N1组相比,有显著性差异(P<0.05)。同N1相比,K230组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.01),随着给药时间的延长,K260组DA含量相较于K230组降低,与N1组相比,具有显著性差异(P<0.01)；K2E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K2E60组DA含量较K2E30组升高,与N1组相比,有显著性差异(P<0.05)。同E30组相比,K1E30组及K2E30组前额叶皮质中DA含量均升高,有显著性差异(P<0.05)。随着时间的延长,K1E60组DA含量水平降低,且低于E60天组,无显著性差异(P>0.05)。(2)在伏隔核中,同N1相比,E30组大鼠前额叶皮质中DA含量明显升高,有显著差异性(P<0.05),随着持续给药时间的延长,相较于E30组,E60组DA含量升高,有显著性差异(P<0.05)；K130组同N1相比,其DA含量明显升高,有显著差异性(P<0.05),随着持续给药时间的延长,相较于K130组,K160组DA含量升高,有显著性差异(P<0.05)。K1E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K1E60组DA含量较K1E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。同N1相比,K230组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K260组DA含量相较于K230组明显降低,具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K2E60组DA含量较K2E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。持续给药30天后,各实验组DA含量水平依次为：K230组>K1E30组>K2E30组>K130组>E30组>N1,K2组DA含量最高(1.018±0.253ng/m;);K1E30组DA含量较K130组明显升高,且明显高于E30组,均具有显著性差异(P<0.05)；K2E组DA含量与K2组比较却明显降低,但仍高于E组,均具有显著性差异(P<0.05)。持续给药60天后,各实验组DA含量水平依次为：K260组>K2E60组>KXE60组>K160组>E60组>N2,K260组DA含量最高(0.803±0.551ng/ml);K1E60组中DA含量较K160组、E60组稍高,但差异性不明显(P>0.05)；K2E60组与K260组比较,DA含量降低,较E组稍有升高(P>0.05)。(3)在腹侧被盖中,同N1相比,E30组大鼠前额叶皮质中DA含量升高,随着持续给药时间的延长,相较于E30组,E60组DA含量升高,有显著性差异(P<0.05)；K130组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K160组DA含量相较于K130组明显增高,具有显著性差异(P<0.05)；K1E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K1E60组DA含量较K1E30组升高,有显著性差异(P<0.05)。同N1相比,K230组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K260组DA含量相较于K230组明显降低,具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K2E60组DA含量较K2E30组升高,有显著性差异(P<0.05)。给药30天后,DA含量水平依次为K230组>K1E30组>K2E30组>K130组>E30组>N1,K2组DA含量最高(1.680±0.262ng/ml)；K1E30组DA含量较K130组明显升高,且高于E30组,均具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与K230组比较却明显降低,但仍高于E组(P<0.05)。给药60天后,DA含量水平依次为：K260组>K1E60组>K2E60组>K160组>E60组>N2,K260组DA含量最高(1.454±0.041ng/ml)。(4)在海马中,同N1相比,E30组大鼠前额叶皮质中DA含量明显升高,有显著差异性(P<0.05),随着持续给药时间的延长,相较于E30组,E60组DA含量升高,差异性不明显(P>0.05),但仍高于N2,存在显著性差异(P<0.05)；K130组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K160组DA含量相较于K130组明显减少,具有显著性差异(P<0.05)；K1E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K1E60组DA含量较K1E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。同N1相比,K230组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K260组DA含量相较于K230组明显降低,具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K2E60组DA含量较K2E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。在持续给药30天组,各组DA含量水平依次为：K230组>K1E30组>K2E30组>K130组>E30组>N1组,K230组DA含量最高(1.265±0.106ng/ml);K1E30组DA含量较K130组明显升高,具有显著性差异(P<0.05);K2E30组DA含量与K230组比较却明显降低(P<0.05)。在周期60天时,DA含量水平依次为：K260组>K1E60组>K2E60组>K160组>E60组>N2,K260组DA含量最高(0.567±0.029ng/ml);K1E60组中DA含量较K160组稍高,没有明显差异(P>0.05)；K2E60组与K260组比较,DA含量降低,没有明显差异(P>0.05)。(5)在纹状体中,同N1相比,E30组大鼠前额叶皮质中DA含量明显升高,有显著差异性(P<0.05),随着持续给药时间的延长,相较于E30组,E60组DA含量升高,存在显著性差异(P<0.05)；K130组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K160组DA含量相较于K130组明显增多,具有显著性差异(P<0.05)；K1E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K1E60组DA含量较K1E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。同N1相比,K230组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长,K260组DA含量相较于K230组明显降低,具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与N1组相比呈升高趋势,有显著性差异(P<0.05),随着给药时间的延长K2E60组DA含量较K2E30组降低,有显著性差异(P<0.05)。与E30组相比,K1E30组与K2E30组的DA含量均明显高于E30组,且具有显著性差异(P<0.01、P<0.05)。在持续给药30天各组中,DA含量水平依次为：K1E30组>K230组>K2E30组>K130组>E30组>N1,K1E30组DA含量最高(2.013±0.416ng/ml);K1E30组DA含量较K130组呈现明显升高,具有显著性差异(P<0.05)；K2E30组DA含量与K230组比较稍降低,具有显著性差异(P<0.05)。在持续给药60天的各组中,DA含量水平依次为：K260组>K1E60组>K160组>K2E60组>E60组>N2,K260组DA含量最高(0.793±0.023ng/ml);K1E60组中DA含量较K160组稍高,但没有明显差异(P>0.05)；K2E60组与K260组比较,DA含量降低,但没有明显差异(P>0.05)。结论：1.采用多次腹腔注射氯胺酮,结合条件性位置偏爱实验的方法成功建立氯胺酮依赖大鼠模型。通过对比,在动物模型上证明氯胺酮存在着很强的精神依赖性潜力。并且氯胺酮与乙醇合用后也表现出明显的条件性位置偏爱。2.乙醇能够增强30mg/lkg氯胺酮引起的DA含量增多效应,推测乙醇可能协同氯胺酮对NMDA受体产生抑制作用,从而增加DA释放使脑部DA含量增加。这种协同作用随着给药时间的延长会有所消退。3.乙醇能够抑制60mg/kg氯胺酮引起的DA含量增高效应,这种抑制作用随着时间的延长逐渐增强。