目的：　　 糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是一种最为常见的糖尿病并发症。DN的发生是多因素、多通路共同作用的结果，晚期糖基化(advancedglycation)、蛋白激酶C(PKC)等细胞内信号分子的激活以及活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)的增加均在DN发病过程中发挥重要作用。其中，高血糖诱导ROS过量生成在DN发病的诸多通路中处于核心地位。硫氧还蛋白(thioredoxin，TRX)系统是一种调节细胞还原/氧化状态的巯基氧化还原酶系统。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxininteracting protein，TXNIP)是一种TRX的内源性抑制物，可以抑制TRX抗氧化功能。p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen－activated ProteinKinase，p38 MAPK)信号转导通路在高血糖状态下被激活，使多种核转录因子活化，影响目的基因的表达，可调节细胞的增殖、分化以及凋亡等，在一定程度上导致和加速了DN的发生、发展。前期研究表明，在血管平滑肌细胞和血管内皮细胞中，高浓度葡萄糖(HG)可以激活p38 MAPK信号通路，诱导TXNIP表达上调。但是，在肾小球系膜细胞内，HG诱导TXNIP表达上调是否也经p38－MAPK信号通路介导尚未见报道。鉴于此，在本实验中，我们检测了HG条件下小鼠肾小球系膜细胞(MMCs)中TRX系统的激活和p38 MAPK信号通路的改变，以探讨小鼠肾小球系膜细胞内p38 MAPK信号通路在HG诱导TXNIP表达上调过程中所发挥的作用。　　 方法：　　 构建针对TXNIP的siRNA干扰质粒pBAsim－U6－Neo－TXNIP－siRNA，使用Lipofectamine2000转染试剂将TXNIP siRNA质粒和对照质粒分别转染MMCs，经G418筛选，建立稳定低表达TXNIP的MMCs细胞系。以正常糖浓度(NG)和NG加甘露醇培养的MMCs为对照，以HG刺激MMCs，分别采用p38激酶抑制剂(SB203580)和抗氧化剂(Tempol)处理MMCs。流式细胞仪检测细胞内的ROS水平，胰岛素二硫键还原法测定细胞内的TRX活性，Western blot检测细胞内p38 MAPK、p-p38－MAPK和TXNIP的表达，ELISA法测定细胞培养液中TGF－β1和纤维连接蛋白水平，PT-PCR检测细胞TXNIP和TGF-β1的mRNA的表达。　　 结果：　　 1、HG诱导MMCs内源性ROS生成、p38MAPK蛋白激活和TXNIP表达的情况　　 经HG诱导后，MMCs内p38蛋白酪氨酸磷酸化水平、ROS水平和TXNIP表达在2小时内均明显升高，24－48小时持续保持在高水平，并且呈现出时间依赖性。在NG或NG加甘露醇的培养条件下，不同时间点的MMCs内三种指标没有差异。　　 2、阻断p38 MAPK通路对HG诱导的MMCs内ROS生成和TXNIP表达的影响　　 与NG组相比，HG诱导组MMCs内ROS水平明显升高，TRX的生物活性明显降低，TXNIP的mRNA和蛋白表达显著增加；与HG组MMCs相比，HG+SB203580处理组MMCs内ROS水平降低，TRX的活性升高，TXNIP的mRNA和蛋白表达均减低。　　 3、敲低TXNIP表达对HG诱导MMCs内TRX活性和ROS产生的影响与HG诱导组MMCs相比，敲低TXNIP表达以及Tempol均能够减少MMCs内TXNIP蛋白和ROS水平，同时提高TRX活性。　　 4、敲低TXNIP表达对HG诱导MMCs内p38蛋白激酶激活的影响。经HG诱导后MMCs内p38 MAPK蛋白激酶的磷酸化水平大幅增加；敲低TXNIP表达以及Tempol均能够下调高糖诱导的p38 MAPK磷酸化水平。　　 5、敲低TXNIP表达对HG诱导的MMCs合成TGF－β1和纤维连接蛋白的影响。　　 HG诱导的MMCs培养液中TGF－β1和纤维连接蛋白含量明显高于NG组；与高糖组相比，敲低TXNIP表达以及Tempol均能够减低培养液中TGF－β1和纤维连接蛋白的含量。HG诱导MMCs内TGF－β1 mRNA表达明显高于NG组；敲低TXNIP表达以及Tempol均能够下调高糖诱导的MMCs内TGF－β1 mRNA表达水平。　　 结论：　　 1、在体外培养的小鼠系膜细胞，高糖能够通过p38 MAPK信号通路调控TXNIP的表达，进一步调节TRX活性，从而影响细胞内ROS的生成。　　 2、敲低TXNIP表达能够抑制高糖诱导的p38 MAPK信号通路的活化以及TGF－1和纤维连接蛋白的合成。