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由于大量的使用合成药物控制病原真菌,造成的环境污染已成为令人关注的重大环境问题之一。因而引发了从植物体中寻找天然活性物质来代替传统药物的研究热潮。本研究主要阐述从广玉兰(Magnolia grandiflora Lima)中分离鉴定新型的生物活性化合物,以期开发型抑茵农药品种。广玉兰叶80%乙醇提取物通过柱层析进行分离、纯化和鉴定活性化合物。根据提取物的抑茵活性,采用生物活性追踪法进行进一步的研究。通过紫外、红外、核磁共振及质谱分析来确定所分离出的化合物结构。主要研究结果如下:
1.采用了茵丝生长速率法测定了广玉兰叶乙醇提取液对8种植物病原茵的抑茵活性。结果表明,当供试浓度为1.0 mg/mL时对苹果腐烂病菌(Valsa mali)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola)的抑菌率比较高,抑茵率分别为81.4%和52.1%。当供试浓度为5.0 mg/mL时,对小麦赤霉病菌(Gibberellazeae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)和苹果轮纹病菌(Physalospora piricolaNose)的抑茵率也较高,均为50.0%以上。乙醇提取物对苹果腐烂病菌和白菜黑斑病茵EC50分别为0.037 mg/mL和1.149 mg/mL。
2.广玉兰叶乙醇提取液以正己烷、乙酸乙酯、正丁醇等溶剂进行萃取,对各萃取层进行活性测定,结果发现正己烷和乙酸乙酯层抑茵活性最高。在萃取物浓度为1.0 mg/mL时,乙酸乙酯层对苹果腐烂病菌和白菜黑斑病菌的抑制效果分别达到了71.8%和44.8%。当浓度为5.0 mg/mL时,抑菌率均为100.0%。乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病茵和白菜黑斑病菌的EC50分别为0.114和1.058 mg/mL。
3对乙酸乙酯萃取层进行硅胶柱色谱和ODS柱色谱分离、纯化后,经活性追踪,得到了2个抗茵活性化舍物A和B。经红外、核磁共振及质谱鉴定,从广玉兰中分离纯化出的化合物A确定为β-谷甾醇,化合物B确定为小白菊内酯。
4.β-谷甾醇对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌、苹果轮纹病菌和小麦赤霉病菌的最低抑茵浓度分别为10ppm、15ppm、5ppm和15ppm,小白菊内酯对苹果腐烂病菌、白菜黑斑病菌和苹果轮纹病菌分别为5ppm、2ppm和5ppm,对小麦赤霉病菌的最低抑茵浓度低于1ppm。结果显示从广玉兰中分离到的抗茵物质具有天然抗茵剂的潜力。