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Lactobacillus paracasei HD1.7是本实验室在2003年从乳酸酸菜发酵液中分离出的一株乳酸杆菌。在对其的研究中发现,该菌的发酵液中含有一种能够抑制多种革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌以及酿酒酵母的肽类物质,且该类物质的生成具有群体效应的特征。Jiro Nakayama et al.(2003)在L.paracasei E93490基因中发现了群体效应组件的身影,并阐明其信号分子可能具有抗菌活性。由此推测,在L.paracasei HD1.7中也有可能存在与L.paracasei E93490相同或相似的情况。至今为止,人们对L.paracasei该方面知之甚少,所以本研究具有非常重要的意义。参考现有的文献数据,本实验首先要通过PCR方法对实验菌株中的拟群体效应反应调节因子编码基因prcR的存在情况进行摸索,证实了该基因的存在。然后利用现代的生物信息学分析手段,对该基因片段的核苷酸组成,蛋白质构象等方面进行预测和对比分析,找寻prcR与其它已报道的反应调节子之间的联系。其次,以窄宿主范围的pUC18质粒为主体,构建可用于插入失活实验的自杀质粒pUC18-prcR-tet。在该质粒上,引入了四环素抗性基因做筛选标记,其上下游均有大约400bp的prcR片段作为同源重组的途径。电转化条件的摸索是将自杀质粒导入实验菌株的重要一环。本实验从感受态细胞的处理与制备,电击电压的大小以及复苏培养基的选择等方面对L.paracasei HD1.7电转化情况进行了探索,获得了最佳的电转条件:用含1%甘氨酸的MRS培养基培养的菌体,在A600为0.78时,经AEB1电转缓冲液处理后,在9kV/cm电压下完成电击,并迅速加入含10%蔗糖的高渗培养基中,复苏2~3h,即可达到最佳的电转化效果。最后,根据以上几方面的数据,通过电转化的途径,将自杀质粒pUC18-prcR-tet导入L.paracasei HD1.7,以期获得prcR基因敲除菌株。对能在Tet平板上生长的菌株进行PCR验证。