苹果和梨果表面酵母多样性及其食用安全性研究

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苹果和梨是中国北方大宗特色水果,年产量和消费量均居世界第一,主要以鲜食为主,在运输、储藏过程中易受微生物的污染,而存在腐败危险。酵母菌是一类单细胞真菌,是水果表面附生菌之一,少数是人的条件致病菌,是食品安全检测的主要对象之一。目前,我国果品酵母菌危害性评估体系不健全,研究水果表面酵母种类及其食用安全性对食源性病原微生物检测、防控具有重要意义。本研究从山东、河北、安徽、甘肃、山西、新疆等产地收集的鲜食苹果、梨表面分离到酵母214株。在形态学特征鉴定的基础上,利用26S rDNAD1/D2区序列分析方法进行分子分类鉴定,共鉴定出16属24种:间型假丝酵母Candidaintermedia、拟间型假丝酵母C.pseudointermedia、桔假丝酵母C. quercitrusa、C. railenensis、C. sp.、C. zemplinina、浅黄隐球酵母Cryptococcus flavescens、汉逊德巴利酵母Debaryomyces hansenii、葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniasporauvarum、东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis、奧默柯达酵母Kodamaea ohmeri、长孢洛德酵母Lodderomyces elongisporus、美极梅奇酵母Metschnikowiapulcherrima、Meyerozyma guilliermondii、Occultifur aff.externus、发酵毕赤酵母Pichia fermentans、克鲁维毕赤酵母P.kluyveri、墨西哥毕赤酵母P.mexicana、Pseudozyma aphidis、粘质红酵母Rhodotorula mucilaginosa、准红锁掷孢酵母Sporidiobolus pararoseus、戴尔有孢圆酵母Torulaspora delbrueckii、Wickerhamomyces subpelliculosa和W.anomalus。结果表明苹果和梨果表面酵母资源丰富。采用MTT法研究24株不同种酵母菌株的发酵液对人食管癌细胞Eca-109、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞mcF-7的细胞毒性,结果表明,菌株YTFSFL-2(Candida zemplinina)、 YTLYSJL-2(Rhodotorula mucilaginosa)、 YTQXHFS-4(Pichia mexicana)、 JNFSL-2(Hanseniaspora uvarum)、 QDFS-3(Cryptococcusflavescens)、BZYXYL-2(Meyerozyma guilliermondii)和JNHJL-1(Debaryomyceshansenii)对人食管癌细胞Eca-109有明显的抑制作用,7株的抑制率范围为49.406%-74.352%,YTLYSJL-2抑制率最高;菌株YTFSFL-2、YTQXHFS-4和JNHJL-1对人肺癌细胞A549有明显的抑制作用,3株抑制率范围为24.593%-39.692%,YTQXHFS-4抑制率最高;菌株YTQXHFS-4、JNFSL-2、JNHJL-1、QDFS-3和BZYXYL-2对人乳腺癌细胞mcF-7的抑制作用明显,5株的抑制率范围为22.868%-72.894%,JNHJL-1抑制率最高;因此初筛出以上7株酵母作进一步筛选,其发酵液对大鼠肾小球系膜细胞HEZY-1都有抑制作用,抑制率范围是10.469%-79.874%,其中YTQXHFS-4和JNHJL-1的抑制作用相当明显,抑制率分别为79.874%、68.682%,同时两者对人食管癌细胞Eca-109、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞mcF-73种癌细胞都有明显抑制作用,抑制率分别为54.093%、39.692%、70.888%,49.406%、24.593%、72.894%。最后筛选出菌株YTQXHFS-4和JNHJL-1作为致病菌的候选菌株,为毒理学、病理学等研究提供菌种材料。
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