论文部分内容阅读
目的:芪蛭通络胶囊为临床上治疗脑中风后遗症的中成药,疗效确切,为探求其药效物质基础,本研究采用拆方与中药血清药物化学相结合的方式,对芪蛭通络胶囊中发挥化痰开窍、息风通络功效的药味进行研究,为该胶囊的药效物质基础研究奠定基础。方法:(1)将SD大鼠分为全方组、化痰开窍与息风通络组(以下简称化痰通络组)、缺化痰开窍与息风通络组(以下简称缺化痰通络组)、模型组、假手术组共五组,采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,通过评价模型大鼠的神经功能,测定脑缺血面积,测定氧化应激指标,如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量,测定炎症反应指标,如肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)含量,观察脑组织HE染色切片,综合评价化痰通络组药味的药效作用;(2)采用超高效液相法(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)进行药效物质基础研究,摸索UPLC液相条件建立8批化痰通络组药材指纹图谱,指认共有峰,并建立单味药、阴性药、对照品、空白血清、含药血清的UPLC图谱,通过各图谱对比,分析化痰通络组药味血中移行成分,并对其来源进行归属,推测化痰通络组药味药效物质基础。结果:(1)与假手术组相比,模型组SOD、GSH-Px活力显著下降,神经行为学评分、脑梗死面积、MDA、IL-1β、TNF-α含量显著上升(P<0.05),说明脑缺血再灌注大鼠模型造模成功。与模型组相比,缺化痰通络组、化痰通络组、全方组均能显著降低脑缺血再灌注大鼠神经行为学评分、脑梗死面积、MDA、IL-1β、TNF-α含量,提高SOD、GSH-Px活力(P<0.05),其中,缺化痰通络组与化痰通络组降低脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积、MDA、IL-1β、TNF-α含量,提高SOD、GSH-PX活力作用没有显著差别(P>0.05),但与全方组相比,缺化痰通络组降低脑缺血再灌注大鼠脑梗死面积、MDA、IL-1β、TNF-α含量,提高SOD、GSH-Px活力作用明显降低(P<0.05),表明化痰通络组药味在全方中起着重要作用。(2)确定UPLC色谱条件为:Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm),流动相:甲醇(A)-0.1%磷酸水(B),梯度洗脱(010min,5%13%A,1015min,13%A;1540min,13%40%A;4060min,40%75%A;7578min,75%78%A;7880min,78%80%A),进样量为1μL,检测波长为210nm,柱温为30℃,流速为0.3mL·min-1。共匹配出36个共有色谱峰,共有峰归属结果显示:第3号峰为尿嘧啶,第4号峰为次黄嘌呤,第12号峰为天麻素、第14号峰为对羟基苯甲醇,36个色谱峰中有4个峰只由天麻所贡献,5个峰只由猪牙皂所贡献,其余峰由两种及两种以上药材共同贡献。各图谱的相互对比研究共发现血中移行成分6种,其中原型入血成分有2种,代谢成分有4种。结论:化痰通络组药味在芪蛭通络胶囊全方中发挥着较为重要的药效作用,进一步表明该方组方的合理性;发现化痰通络组血中移行成分有6种,进一步阐明芪蛭通络胶囊发挥药效作用的物质基础。同时,本研究表明拆方结合中药血清药物化学进行中药复方药效物质基础的研究思路具有一定可行性。