七叶皂苷钠对大鼠脊髓半横断损伤后Caspase-3表达的影响

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目的:在脊髓半横断损伤(hSCI)的大鼠动物模型上,观察七叶皂甙钠对损伤脊髓的影响。通过观察模型大鼠四肢运动功能、骨骼肌横截面积及直径的改变,同时检测损伤脊髓中特异蛋白酶Caspase-3的表达,探讨七叶皂甙钠对脊髓损伤的保护作用及机制。方法:将30只SD成年大鼠随机分成:正常组(A组),不做任何处理,生理盐水组(B组)和七叶皂苷钠组(C组),每组10只。B组和C组建立稳定的腰2-3脊髓左侧半横断损伤模型,分别于造模前30min经尾静脉注入生理盐水1.5ml或七叶皂苷钠6mg/kg(用1.5ml生理盐水溶解)。各组分别于术前、术后第1天、术后第3天、术后第5天、术后第1周、术后第2周、术后第3周及术后第4周各进行一次BBB评分和IP实验,术后第4周用4%多聚甲醛灌注所有动物大鼠,切取取腰3-腰5脊髓节段和左小腿骨骼肌。骨骼肌组织经石蜡包埋、切片、HE染色,采用Image-pro plus5.0.2图文分析软件测量各组大鼠小腿骨骼肌的横截面积和直径。脊髓组织经石蜡包埋、切片后用SABC法分别行Caspase-3免疫组化染色,计数免疫组化反应阳性细胞数,应用Image-pro plus5.0.2图文分析软件测量各组Caspase-3免疫组化阳性反应物的平均光密度值。用SPSS13.0统计分析软件处理数据,P<0.05,结果有统计学意义。结果:生理盐水组(B组)和七叶皂苷钠组(C组)BBB评分在术后第1天均为0,后渐增高,术后第3周、第4周C组评分(10.28±0.69;11.61±0.71)较B组评分(6.59±0.46;6.89±0.31)高,差异有统计学意义(P <0.05)。B组、 C组的IP试验在术后第1天从术前的86°降至11°左右,后渐升高。术后第4周C组(40.79±1.24)较B组(32.17±0.97)高,差异有统计学意义(P <0.05)。B组、 C组在术后第4周左侧小腿三头肌横截面积及直径均较正常组(954.11±125.65;34.58±3.17)减少, C组(597.83±115.49;26.71±2.11)减少幅度较B组(328.10±58.01;20.86±1.62)小,差异有统计学意义(P <0.05)。在各个组的脊髓神经细胞中,Caspase-3都有表达,其阳性产物存在于细胞浆内。生理盐水组(B组)及七叶皂苷钠组(C组)的阳性神经细胞量以及平均光密度值比起正常组(14.54±1.62;(3.27±0.89)×10-2)增加,C组(21.34±2.55;(6.67±0.23)×10-2)增加幅度较B组(29.10±2.05;(7.83±0.21)×10-2)小,差异有统计学意义(P <0.05),结论:1、脊髓半横断损伤能够诱发caspase-3的表达。2、七叶皂苷钠能降低caspase-3的表达,具有抑制细胞凋亡的作用,是其可能的脊髓半横断损伤保护机制。3、七叶皂苷钠可促进脊髓半横断损伤后大鼠运动功能恢复。4、七叶皂苷钠能减轻脊髓半横断损伤后大鼠小腿三头肌的萎缩程度。
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