褐背蒲桃提取物农用杀菌活性研究

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天然产物生物活性及机理研究是绿色农药创制的挑战性课题。海南岛属热带地区,植物资源丰富且国内外研究较少,是探索发现绿色农药的理想植物宝库。基于此背景,本论文通过评价热带植物提取物农用生物活性,筛选出具高效抑菌活性的褐背蒲桃提取物及鉴定出其活性成分,并探究活性成分的初步抑菌机理,主要研究内容如下:(1)植物提取物农用生物活性筛选。筛选了海南省昌江和文昌地区40种植物甲醇提取物,发现褐背蒲桃(Syzygium infrarubiginosum)甲醇提取物具有广谱抗菌活性,对7种真菌的抑制率均在65%以上,萃取分相后研究发现石油醚相具有广谱抗菌活性,而乙酸乙酯相、正丁醇相、水相抑菌活性较差。(2)以抑菌活性为导向分离活性成分。从石油醚相中分离出三种活性成分化合物1-3。抑菌活性研究表明,化合物1-3对7种植物病原真菌均具有广谱抗菌活性(EC50分别为4.89~16.84μg m L-1、6.52~17.65μg m L-1、6.88~14.90μg m L-1),其中化合物1对香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)菌丝的抑制效果最为显著(EC50=4.89μg m L-1)。(3)褐背蒲桃提取物和化合物1-3的活体抑菌效果。盆栽豇豆白粉病(Podosphaera xanthii)活体防效实验表明褐背蒲桃石油醚萃取相(PE)和化合物1-3均具有高效抗白粉病活性。化合物1浓度为6.25μg m L-1、12.5μg m L-1、25μg m L-1时,PE提取物抑菌效果分别为62.4%、78.7%、97.8%,显著高于蛇床子素;浓度为25μg m L-1时,化合物1-3和丙环唑有相似的抑制率效果(94.6%和90.3%)。浓度为100μg m L-1时,褐背蒲桃PE提取物对香蕉炭疽病活体防效和芒果采后病害活体防效分别为82.3%和91.2%,均优于杀菌剂嘧菌酯。大田实验结果表明,5%褐背蒲桃微乳剂对黄瓜白粉病具有明显的防效,第6天和第14天的防效为分别为70.8%和80.7%。(4)化合物1对香蕉炭疽菌孢子萌发的影响。实验结果表明化合物1对孢子萌发有显著的抑制作用,在10μg m L-1时,抑制率达到95.4%。(5)化合物1对香蕉炭疽病原菌菌丝和细胞结构的影响。通过光学显微镜和透射电镜发现,化合物1处理后,香蕉炭疽菌丝形态出现畸形、弯曲,菌丝细胞壁明显变薄和细胞器液泡化等,表明化合物1可能破坏了香蕉炭疽病菌丝的细胞壁的完整性和刚性结构。(6)化合物1对香蕉炭疽菌细胞膜通透性的影响。结果表明,随着化合物1(5μg m L-1和10μg m L-1)处理的时间增长,渗透率逐渐上升,在9 h时处理组的渗透率分别为45.2%和45.5%,而对照组渗透率增长较缓,无明显变化,因此化合物1对香蕉炭疽菌丝细胞膜具有一定的破坏作用,导致细胞质内容物外渗。(7)化合物1对香蕉炭疽菌生化指标的影响。实验结果表明化合物1对可溶蛋白和还原糖含量变化不明显,但对几丁质含量和几丁质酶活都产生显著影响,变化均在40%以上,可见化合物1显著影响香蕉炭疽菌几丁质的合成与分解,从而影响菌丝顶端生长、分枝以及细胞壁分化等形态变化。(8)化合物1对香蕉炭疽菌呼吸作用的影响。结果表明,随着化合物处理时间增长,处理组呼吸作用明显受阻,在7 h时处理组的呼吸抑制率达到了80%以上,且比嘧菌酯抑制效果更明显,同时伴随着丙酮酸含量的明显变化(降低了40.2%)。以上实验从生物活性和作用机理两个方面分别探究褐背蒲桃提取物及化合物1-3的生物活性和化合物1对香蕉炭疽菌的抑菌机理。研究结果表明,褐背蒲桃提取物及化合物1-3对多种植物病害均有良好的抑制效果,化合物1对香蕉炭疽菌的细胞膜的几丁质和几丁质酶的影响最为明显,也影响了靶标菌能量代谢过程,导致细胞凋亡,从而达到抑菌效果。
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