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背景垂体瘤目前的治疗手段包括手术、放疗、药物等,但都有尚不完善的方面,尤其对于反复复发的一些大腺瘤来说。替莫唑胺(TMZ)是DNA烷化剂类化疗药,可透过血脑屏障,治疗胶质瘤和其他颅内肿瘤。目前TMZ在垂体瘤上的试验性用药尚处起步阶段,已发现对部分患者效果不佳,出现耐药的情况。有研究发现二氢叶酸还原酶抑制物乙胺嘧啶(PYR)协同替莫唑胺可使原对TMZ耐药的黑色素瘤细胞重新对常规用量TMZ敏感。若此协同作用对耐TMZ垂体腺瘤亦有效,则将会是垂体瘤TMZ治疗的一项进步。目的探索与替莫唑胺协同能克服肿瘤对其耐药性的药物,证明替莫唑胺在乙胺嘧啶协同下,能够增强其治疗垂体腺瘤时的细胞毒作用和抗耐药性,并探索其作用机制。方法普通细胞培养、耐药细胞筛选、MTS测细胞相对存活率、台盼蓝染色测细胞死亡率、PI染色流式细胞仪计数细胞周期分期、蛋白免疫印迹(Western Blot)测细胞特定蛋白相对含量等结果和结论1本实验在离体细胞水平证实了TMZ在PYR协同下,能够增强其治疗垂体腺瘤的细胞毒作用。结合PYR的药物特性,可以认为PYR是垂体腺瘤TMZ治疗的有潜力的联合用药伙伴。2本实验尝试筛选了对替莫唑胺相对耐药的小鼠促性腺激素腺瘤αT3-1细胞,在500umol/L的替莫唑胺环境中能稳定存活、缓慢增殖。其替莫唑胺拮抗蛋白MGMT含量有所升高。3对上述相对耐药的细胞株,TMZ+PYR联合用药的协同作用较普通细胞株更显著,提示PYR的存在能增强TMZ的抗耐药性。临床上TMZ治疗效果不满意的垂体腺瘤,可尝试加用PYR联合用药治疗,以避免增大TMZ用量引起的较强副作用。4本实验验证了TMZ单药的DNA破坏、促凋亡及G2期阻滞作用,符合其理论机制；验证了PYR单药的DNA破坏、促凋亡及S期阻滞作用,并证实上述细胞毒作用源于PYR的叶酸拮抗效应。5TMZ+PYR联合用药协同作用可以“双重打击”效应解释,可能有一部分细胞在两药效果单纯加和的计算中无法统计入死亡细胞比例中,但在联合用药存活率计算时则以死亡细胞统计,由此得到<1的CI指数。6TMZ+PYR联合用药的协同作用并非通过调节替莫唑胺拮抗蛋白MGMT的表达量实现,加用PYR不改变细胞的MGMT蛋白含量。