论文部分内容阅读
β-受体激动剂类和β-受体激动剂类药物是具有苯乙醇胺结构的肾上腺素类合成药物,临床上分别用于治疗呼吸系统和心血管系统疾病。然而,在畜牧业养殖中常被非法用于促进动物生长,导致在动物组织中残留,对人体健康造成威胁。所以,对β-受体激动剂和β-受体阻断剂类兽药残留的检测是动物源性食品安全的关键环节,但是部分新型药物仍缺少相关检测方法。本研究拟建立同时测定牛奶中卡布特罗、沙丁胺醇、克伦丙罗、莱克多巴胺、克伦特罗、福莫特罗、克伦潘特、马布特罗、丙氧苯酚胺、班布特罗、马喷特罗、苯乙醇胺A、喷布特罗和沙美特罗等14种β-受体激动剂和阿替洛尔、索他洛尔、β-羟甲基美托洛尔、噻吗洛尔、醋丁洛尔、美托洛尔、左布诺洛尔、塞利洛尔、氧烯洛尔、比索洛尔、卡拉洛尔、普萘洛尔、阿普洛尔、丁呋洛尔、贝凡洛尔、奈必洛尔等16种β-受体阻断剂类药物的多残留检测方法。1.建立和优化测定30种β-受体激动剂和β-受体阻断剂类药物的UPLC-MS/MS检测方法。分别对锥孔电压、碰撞能量、母离子、子离子等质谱条件进行优化,对流动相组成和比例、梯度洗脱条件等色谱条件进行优化。确定采用Waters Acquity UPLCTMCSH C18(2.1*100 mm,1.7 μm)色谱柱进行分离,乙腈和0.1%甲酸水为流动相,采用梯度洗脱方式进行分离,流速为0.3 mL/min;ESI源正离子模式进行多反应监测,外标法定量。获得各化合物的质谱检测参数,30种待测物可在9.0 min内得到了很好的分离和确证。2.对牛奶样本中30种待测物的样本前处理技术进行优化。分别对提取溶液、酶的用量、pH和温度与提取时间、固相萃取柱的选择、淋洗和洗脱条件进行优化。确定用乙酸调节牛奶pH至5.2,经30μLβ-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶37℃震荡过夜水解,用3%(v/v)乙酸乙腈溶液经涡动、震荡、离心提取上清液,氮气吹干有机相,提取液经MCX柱上样,经水和甲醇淋洗,5%氨化甲醇洗脱,40℃氮气水浴吹至近干,1 mL0.1%(v/v)甲酸水-乙腈(9:1,v/v)复溶。3.系统考察了同时测定牛奶中30种β-受体激动剂和β-受体阻断剂类药物的UPLC-MS/MS方法学指标。评价了线性关系、检出限、定量限、准确度、精密度、基质效应、稳定性等考核指标。实验得出,各药物在0～50 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数(r2)均≥0.991;检测限为0.1～0.2 μg/L,定量限为0.3～0.5 μg/L;在LOQ、2倍LOQ、10倍LOQ三个加标浓度下,各药物平均回收率61.36%～88.72%,71.49%～103.69%;67.72%～99.07%;批内 RSD 分别为 3.75%-17.92%,2.76%-17.52%,3.42%-16.04;批间 RSD 分别为 1.43%～17.62%,4.1 1%～16.43%,3.52%～16.67%;通过空白样液加入标准品校正基质效应的影响,基质效应率在29.1%～151.2%范围内;分别储存牛奶样品于-20℃和4℃下各7d,在-20℃下平均回收率为74.80-105.24%,变异系数为1.73-15.93%、4℃下平均回收率为72.18-94.78%,变异系数为3.80-16.68%,各药物未见降解,稳定性好。该方法分析时间短,定性定量可靠,可用于牛奶中30种β-受体激动剂类和β-受体激动剂类药物残留检测。综上所述,本研究为了对牛奶中β-受体激动剂和β-受体阻断剂类药物多残留分析,通过优化液相色谱的分离条件、质谱的检测条件、提取溶剂的选择、酶解环境的pH、温度、时间和用量等条件来提高各药物的回收率,进行方法学验证,从而建立准确可靠的UPLC-MS/MS测定牛奶中30种β-受体激动剂类和β-受体阻断剂类药物残留的分析方法。该方法可在9.0 min内对30种药物进行准确的定性和定量分析,操作简单,快速,检测限低,灵敏度高,重复性好,结果可靠。