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目的:研究N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰调控慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞生长和药物反应的作用,并探讨其机制。方法:(1)通过ELISA 比较在CML患者和健康供体CD34+细胞中m6A含量;通过Q-RT-PCR比较m6A相关基因在细胞中的表达。(2)用 RNA dotblot 分别在敲低和过表达 YTHDF2(YTH domain family 2)的K562中检测m6A水平;检测敲低和过表达YTHDF2后K562的生长和集落生成能力;在CML患者CD34+细胞中敲低YTHDF2后检测集落生成能力;在K562和耐药患者原代干/祖细胞中影响YTHDF2表达,并协同一定浓度的甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate,IM)处理后进行细胞集落生成(CFC)检测。(3)RNA-seq筛选K562细胞中受YTHDF2表达影响的差异表达基因,并通过Q-RT-PCR验证其表达;使用精胺普鲁蓝递送的方式,在敲低YTHDF2的K562细胞中沉默 TINAGL1(tubulointerstitial nephritis antigen-like 1),协同 IM 处理,进行 CFC检测;通过 RNA 甲基化免疫共沉淀实验(methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)和 RNA 免疫共沉淀实验(RNA immunoprecipitation,RIP)研究 YTHDF2 对 TINAGL1的调控;在 K562 中沉默 ZC3H13(zinc finger CCCH-type containing 13),检测甲基化水平、生长和集落生成能力以及TIN4GL1表达。结果:(1)CML患者干/祖细胞中m6A含量异常降低,且YTHDF2和ZC3H13在CML疾病状态下异常高表达。(2)YTHDF2调节K562细胞中m6A水平,其表达和m6A水平呈负相关。YTHDF2能够对K562细胞的生长和集落生成能力起到促进作用,且沉默YTHDF2能够降低CML患者CD34+细胞的集落生成能力。沉默YTHDF2增加K562细胞对IM的敏感性,过表达YTHDF2增加这些细胞对IM的耐受性。(3)RNA-seq分析和体外验证发现沉默YTHDF2可增强TINAGL1的表达,YTHDF2识别并结合TINAGL1转录本中的m6A位点。TINAGL1在疾病状态下表达异常降低,过表达TINAGL1抑制K562细胞的集落生成能力,在敲低YTHDF2的K562中沉默TINAGL1能够部分挽回YTHDF2敲低导致的细胞集落生成能力下降和IM增敏。最后,CML细胞中高表达的甲基转移酶复合物成员ZC3H13也调控K562细胞的生长和IM反应,且ZC3H13沉默也能增高TINAGL1的表达。结论:在CML疾病状态下,m6A水平异常降低,YTHDF2和ZC3H13同时高表达,两者共同作用而降低抑癌基因TINAGL1的表达,以促进CML细胞生长并使它们对IM处理耐受。