【摘 要】
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牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus)隶属于黄病毒科(Flaviridae)、瘟病毒属(Pestivirus)。该病毒可以造成牛只的持续性感染,并且不表现出显著的症状,也可引发牛
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牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus)隶属于黄病毒科(Flaviridae)、瘟病毒属(Pestivirus)。该病毒可以造成牛只的持续性感染,并且不表现出显著的症状,也可引发牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea, BVD),临床表现为白细胞减少、黏膜糜烂溃疡、腹泻及怀孕母牛流产或产出畸形胎。该病的流行已经给世界养牛业造成了巨大的经济损失。NS3蛋白具有较高的免疫原性,在病毒感染过程中,免疫系统的CD4~+ T细胞主要识别NS3和E2两种蛋白,并可诱导免疫细胞产生针对该蛋白的抗体。因此检测NS3蛋白抗体水平可以作为检测牛病毒性腹泻病毒感染的有效指标之一。本研究利用大肠杆菌表达系统分段表达重组NS3蛋白,利用标准阳性血清筛选NS3蛋白B细胞线性表位区,共筛选出6段具有反应原性的蛋白肽段;(1VCKKITEHERCHVNI15),(20AFFGVMPRGTTPRAPVR36),(46RRGLETGWAYTHQGGI61),(281EGDMATGITYASYGYFC297),(426YSGEDPANLRVVTSQSPYVVVATNAIESGV455)和(481FIVTGLKRMAVTVGEQA497)。筛选出的表位不但可以作为BVDV的检测抗原建立多种检测血清学检测手段,亦为今后开展非结构蛋白NS3的抗原结构甚至致病机理的研究提供理论依据。同时本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析显示平均P-distance为0.07,基于NS3的系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV 1型。
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