本研究旨在对抗CD28的单链抗体进行人源化改造,并连入具有肿瘤靶向作用的寡肽KCCYSL,以期获得具有刺激T细胞增殖和靶向肿瘤双重作用的融合蛋白。在先前的研究中,我们运用核糖体展示技术筛选出了一株抗CD28的单链抗体(anti-CD28scFv)。但它缺少Fc片段,在体内的半衰期短,很容易从血液中清除,而且在鉴定方面也存在困难。为弥补这一不足,我们首先提取出人外周血单个核细胞的总RNA,然后运用RT-PCR扩增出IgG1CH3基因,再运用SOE PCR连接到anti-CD28scFv基因上,得到s-C基因。为了获得靶向肿瘤的功能,我们运用SOE PCR将靶向Her2的KCCYSL基因与上述s-C基因相连得到s-C-K基因。最后将s-C-K基因插入到pET43.1a载体里,转入E coliBL21(DE3)中诱导表达。然后运用金属螯合亲和层析(Ni-NTA)纯化。为准确地检测融合蛋白两部分的功能,我们研制出s-C和C-K蛋白作为阴性对照。间接ELISA和MTT结果表明s-C-K融合蛋白仍具备对CD28分子的高亲和力,并能辅助刺激人外周血T细胞的增殖。SK-OV-3细胞ELISA结果表明融合蛋白的寡肽部分具有良好的肿瘤靶向作用。anti-CD28scFv-CH3-KCCYSL这一双功能融合蛋白为高表达Her2的肿瘤的诊断与靶向治疗提供了基础。