【摘 要】
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目的研究白藜芦醇对肺腺癌细胞A549的放射增敏效果,探究其是否通过影响Stim和/或Orai蛋白表达来调节细胞内钙库操纵性钙内流(SOCE)机制实现增敏效果,为改善晚期肺癌患者的放
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目的研究白藜芦醇对肺腺癌细胞A549的放射增敏效果,探究其是否通过影响Stim和/或Orai蛋白表达来调节细胞内钙库操纵性钙内流(SOCE)机制实现增敏效果,为改善晚期肺癌患者的放疗效果和预后提供研究基础。方法选取肺腺癌A549细胞传代培养,取对数期细胞将其分别用不同放射剂量(0,2,4,6 Gy)联合不同浓度的白藜芦醇(0,10,50,100,150,200μmol/L)处理,利用细胞计数和镜下观察,CCK8分析法和线粒体膜电位检测法比较细胞处理前后的死亡情况。分析结果选取最优剂量组,设立单一处理组和空白对照组,利用Western blot法检测处理前后细胞内stim和Orai家族蛋白中的STIM1,Orai1及STIM2,Orai2和Orai3的表达水平。同时进行钙成像技术法检测毒胡萝卜素诱导的钙库操纵性内流(SOCE),此外利用过表达技术构建载体验证上述结果。结果1.通过细胞计数与镜下观察,CCK8检测,线粒体膜电位检测法,本实验发现RSV联合放射比单独的放射能诱导更多的明显细胞死亡,这种关系呈剂量依赖性,其中白藜芦醇100μmol/L联合放射4 Gy是细胞死亡最多而相对剂量最小的最优组合。2.白藜芦醇联合放射可以明显降低肺癌A549细胞中STIM1和Orai1的表达水平,但对STIM2,Orai2和Orai3表达水平无明显影响。3.与单一的处理相比,白藜芦醇联合放射处理肺癌A549细胞可明显抑制毒胡萝卜素诱导的钙库操作性钙内流(SOCE)。4.STIM1和Orai1的过度表达可以逆转RSV诱导的SOCE抑制,并减少白藜芦醇联合放疗导致的A549细胞死亡结论白藜芦醇可以明显增强肺癌A549细胞放射敏感性的效果,且这种效果可能是通过下调STIM1和Orai1表达,抑制细胞内SOCE介导的。
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