低浓度胆盐对人正常胆管成纤维细胞的生物学影响

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:liongliong497
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目的:胆盐在胆道生理中发挥着重要作用,超负荷的胆盐能够导致细胞的凋亡与坏死,而有关生理浓度的胆盐对胆管成纤维细胞增殖有何影响研究较少。探索低浓度胆盐对胆管成纤维细胞增殖和TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达的影响,对胆管良性瘢痕狭窄的防治具有指导意义。方法:1、采用酶消化法结合组织块法分离培养人胆管瘢痕成纤维细胞、正常胆管成纤维细胞,并通过光镜下的细胞形态和免疫细胞化学染色鉴定。2、用含有0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40和80umol/L胆盐的培养液继续培养正常胆管成纤维细胞24h、48h、72h, MTT法检测胆管成纤维细胞存活率,找到促进细胞增殖的最适浓度;并用此浓度干预24h后的细胞进行流式细胞周期检测,计算胆管成纤维细胞S期的相对百分比;3、免疫荧光、免疫印迹技术检测胆盐干预前后胆管成纤维细胞中TGF-β1、Smad3、α-SMA的蛋白表达情况。结果:1、体外培养的人胆管瘢痕成纤维细胞和正常胆管成纤维细胞均呈长梭形,波形蛋白(+),角蛋白(-),确定为实验所需的成纤维细胞。2、以低浓度胆盐刺激人正常胆管成纤维细胞后,MTT法检测结果显示当胆盐浓度为0.625-10.Oumol/L时对正常胆管成纤维细胞具有明显促增殖作用(P值均<0.05),且表现为时间依赖性。流式细胞仪检测S期细胞数所占比例明显增多,G0/G1期细胞减少(P值均<0.05)。而对细胞G2/M期无明显影响。3、人正常胆管成纤维细胞TGF-β1、 Smad3蛋白表达较低,主要表达在胞浆;a-SMA几乎无表达。胆管瘢痕成纤维细胞TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白表达较正常胆管细胞高。4、正常胆管成纤维细胞受低浓度(1.25umol/L)胆盐刺激后,胞内TGF-β1、Smad3、α-SMA蛋白明显升高,Smad3蛋白向胞内核转位。结论:低浓度的胆盐可促进人正常胆管成纤维细胞的增殖,并存在时间依赖性;同时低浓度的胆盐可使人正常胆管成纤维细胞表型向肌成纤维样细胞转化。其机制可能与TGF-β1/Smad3通路有关。
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