【摘 要】
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植物染色体研究是基因定位、构建物理图谱的重要前提。目前,梅花的核型分析主要通过常规制片法实现,而利用细胞生物学手段进行核型分析还未见报道。一方面由于木本材料的制约
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植物染色体研究是基因定位、构建物理图谱的重要前提。目前,梅花的核型分析主要通过常规制片法实现,而利用细胞生物学手段进行核型分析还未见报道。一方面由于木本材料的制约,限制了其取材范围。另一方面梅花属小染色体植物,其制片效果还有待改善。本研究对现有梅花染色体制片技术进行改良,并通过制片材料选取,探索梅花的染色体周年性制片技术。首次采用玉米45SrDNA序列作为探针,利用荧光原位杂交(FISH)技术,将探针定位于梅花中期染色上,并基于荧光原位杂交结果进行核型分析。主要研究结果如下：1、拓展了梅花染色体制片取材类型,除了传统的茎尖取材,还利用梅花未成熟种子、组织培养获得的伸长胚根、一年生实生苗顶端生长点等分生组织,均获得了分散程度高、清晰的染色体制片。2、经改良的去壁低渗火焰干燥制片法,省略预处理过程,直接进行卡诺低温固定,有效拉伸了染色体长度。这一改良有利于FISH试验结果的显微观察,并提高制片效率。3、玉米45SrDNA探针在梅花中其染色体中发现有6个信号点,主要分布于第1、3、7号染色体上,不同品种略有差异。信号点主要分布于染色体长臂末端,结合染色体核型参数,推测梅花从进化上看属较原始类型。荧光原位杂交技术在梅花中的成功探索,为其精确核型分析、基因定位、物理图谱构建等方面的研究,奠定了一定的技术基础,具有较重要的应用价值。
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