论文部分内容阅读
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是当前影响世界养猪业最重大的传染性疾病,给世界养殖业造成了巨大的经济损失。接种疫苗是目前控制PRRS发生和传播唯一可行的措施。而当前商业化的PRRS病毒(PRRSV)疫苗存在诱导的免疫应答迟缓以及免疫保护性弱等弊端,对PRRSV感染不能提供完全的免疫保护。为改善疫苗的免疫效力,需要在疫苗中添加佐剂联合使用。 合欢皮皂苷(AJSAF)是从合欢皮中提取纯化得到的佐剂活性有效部位。前期实验证明,AJSAF能显著增强模式抗原卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)和禽流感鸡痘病毒载体活疫苗(rFPV)受免小鼠抗原特异性细胞免疫和体液免疫应答,并能同时诱导Th1/Th2免疫反应。同时,AJSAF的毒性和溶血性比Quil A低。因此,AJSAF是一种理想的候选疫苗佐剂。本实验以小鼠为实验动物,评价AJSAF对猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(CH-1R株)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(JXA1-R株)和猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-1R株)三种疫苗的佐剂作用,并初步探讨其作用机制。 1.AJSAF对猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗的佐剂作用 猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(CH-1R株)(CH-1R MLV)单独或联合不同剂量的AJSAF(5、10、20μg)皮下免疫雌性BALB/c小鼠,两周后加强免疫,二免后14天处死小鼠,采集血液分离血清,剖取脾脏制备单细胞悬液,测定各项免疫学指标。结果表明:AJSAF不仅能显著增强CH-1R MLV受免小鼠中PRRSVN蛋白特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体滴度(P<0.001),也能增强由ConA、LPS和PRRSVN蛋白刺激的脾细胞增殖反应、PRRSVN蛋白所诱导的迟发型超敏反应以及自然杀伤细胞(NK cells)的杀伤活性(P<0.05,P<0.01orP<0.001)。AJSAF能显著诱导CH-1R MLV受免小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-10的分泌以及上调Th1和Th2型细胞因子(IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ)和转录因子(STAT4、STAT6、T-bet和GATA-3)的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01orP<0.001)。AJSAF也能增加受免小鼠脾细胞中PRRSV N蛋白特异性Th1(IL-2+和INF-γ+)和Th2(IL-4+和IL-10+)CD4T细胞比率以及Tc1(IL-2+和INF-γ+)和Tc2(IL-4+和IL-10+)CD8T细胞比率(P<0.05orP<0.01)。 2.AJSAF对高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗的佐剂作用 高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(JXA1-R株)(JXA1-R MLV)单独或联合不同剂量的AJSAF(5、10、25、50μg)皮下免疫雌性ICR小鼠,两周后加强免疫。采用间接ELISA法检测二免后两周小鼠血清中PRRSVN蛋白特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度。结果表明,AJSAF(5、10、25、50μg)能显著增强JXA1-R MLV受免小鼠血清中PRRSVN蛋白特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体滴度(P<0.05,P<0.01orP<0.001),说明AJSAF能显著增强JXA1-R MLV受免小鼠的体液免疫反应。 3.AJSAF对猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的佐剂作用 猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-1R株)(CH-1R IAV)单独或联合不同剂量的AJSAF(5、10、25、50μg)皮下免疫雌性ICR小鼠,两周后加强免疫。采用间接ELISA法检测二免后两周小鼠血清中PRRSVN蛋白特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度。结果表明,AJSAF(5、10、25、50μg)能显著增强CH-1R IAV受免小鼠血清中PRRSVN蛋白特异性IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b抗体滴度(P<0.05,P<0.01or P<0.001)。说明AJSAF能显著增强CH-1R IAV受免小鼠的体液免疫反应。 上述结果表明了AJSAF联合三种PRRSV疫苗可提高受免小鼠的体液免疫应答。此外,AJSAF可以在CH-1R MLV受免小鼠中改善机体的体液免疫和细胞免疫并且诱导一种平衡的Th1/Th2和Tc1/Tc2免疫应答,是一种理想的候选PRRSV疫苗佐剂。