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目的 构建人疱疹病毒6型(HHV-6)101K被膜蛋白的原核高效表达克隆，制备用于活动性HHV-6感染血清学诊断的基因工程抗原。 方法 应用细胞培养技术从临床唾液标本分离HHV-6毒株，出现细胞病变者用HHV-6特异性引物及限制性酶切分析法进行初步鉴定；PCR扩增HHV-6B 101K被膜蛋白主要抗原决定簇区(666～834aa)编码基因片段(nt2347～2853)，并导入T载体进行测序，与Genebank标准毒株序列比较以进一步鉴定。目的基因及表达载体pThioHis A分别经双酶切后连接，转化宿主菌E.coli BL21，IPTG诱导蛋白表达，表达产物经镍-敖合物琼脂糖树脂柱亲和层析初步纯化，以Western-Blot鉴定其抗原性和特异性。用纯化重组蛋白包被ELISA反应板，检测197份血清中HHV-6 IgM抗体，与间接免疫荧光(IFA)检测的结果进行比较，同时检测15份HCMV阳性血清，以分析重组蛋白的特异性。 结果 PCR扩增获得的目的基因序列与Genebank中HHV-6B标准毒株Z29序列一致。HHV-6 101K融合蛋白可在E.coli BL21中有效表达，表达产物为硫氧还(HP-thioredoxin)融合蛋白，纯化后获得单一目的蛋白条带。Western-blot检测结果表明该融合蛋白可与12份HHV-6 IgM阳性血清中的10份(83.3％)发生反应，而与8份阴性血清均不发生反应。用该融合蛋白包被ELISA反应板，检测197份血清中HHV-6 IgM抗体，与IFA检测血清IgM抗体的诊断符合率为95.4％，检测15份HCMV阳性血清，均为阴性。 结论 HHV-6 101K重组蛋白具有良好的抗原性和特异性，进一步完善后可用于HHV-6活动性感染的诊断，为进一步研制开发新型HHV-6诊断试剂提供了有价值的理论依据和实验基础。