苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的分离纯化与抑菌作用研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbshwydd
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植物的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)可与病源菌的多聚半乳糖醛酸酶(PG)特异结合,抑制病原菌侵染,因此具有抗病作用。本研究的目的旨在从苹果果皮中分离纯化出PGIP并对其进行抑菌作用研究,从而为PGIP基因及其表达产物的进一步利用奠定基础。本研究以西北农林科技大学园艺试验场的膨大期的富士苹果果皮为材料,经醋酸钠缓冲液抽提,35%-75% (NH4)2SO4分级分离沉淀、醋酸钠缓冲液透析、CM-Sephadex C -50阳离子交换层析、聚乙二醇6000浓缩、Sephadex G-100凝胶过滤层析等步骤分离纯化出PGIP并对其分子量、活性及抑菌作用等性质进行分析,主要结果如下:1、建立了苹果果皮PGIP的提取与纯化方法2000 g膨大期的苹果果皮经匀浆、pH5.5,25 mmol/L乙酸钠缓冲液(含5×10-5 mol/L EDTA-Na2、0.7μg/ml胃蛋白酶抑制剂、1.5% PVP、174μg/ml PMSF、10 mmol/L DTT)缓冲液抽提、35%~75%硫酸铵沉淀、醋酸钠缓冲液透析、聚乙二醇6000浓缩、CM-Sephadex C-50阳离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析分离纯化出0.7 mg苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白。2、首次通过实验证实了PGIP对病原真菌PG和病原菌生长的抑制作用纯化出的PGIP对苹果褐腐菌(Monilinia fructigena)PG有较强的抑制作用,对苹果褐腐菌(Monilinia fructigena)的最初生长有抑制作用,使其菌丝生长稀疏,生长势弱。正常生长的苹果褐腐菌(Monilinia fructigena)遇到PGIP后出现波浪状异常生长情况,所以PGIP对苹果褐腐菌(Monilinia fructigena)的继续生长具有抑制作用。
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