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伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus,PRV）引起的一种高度接触性传染病,给我国的养猪业造成巨大的经济损失。目前虽然已经建立了区分疫苗免疫和野毒PR感染的PCR和ELISA方法,但是这些方法均需要特殊的仪器和有工作经验的人员进行操作,不适合基层生产单位使用,因此迫切需要一种简便、快速的鉴别诊断方法。基于国内广泛应用gE基因缺失苗进行免疫的现状,利用红细胞凝集试验的原理,将一种抗人红细胞非凝集型单抗的单链抗体基因（2E8）与PRV-gE抗原表位基因融合,构建一种用于快速鉴别PRV野毒株感染的重组双功能分子,建立一种利用红细胞凝集试验进行PR野毒感染的鉴别诊断方法。若该诊断方法研制成功,将对该病的快速诊断具有重要的作用。为了获得双功能性分子中PRV gE抗原肽,并摸清当前广西PRV的流行病学情况和遗传变化规律,对来源于广西13个地（市）122个不同规模猪场163份病料进行PCR鉴定,结果检测出PRV阳性6份,阳性率3.7%;gE-ELISA血清学检测玉林、南宁、桂林、贵港等8个规模猪场的61份血清,其中7份呈阳性,阳性率11.5%。对6株PRVgE胞外基因进行序列测定,并同国内外PRV代表株及广西地方株相应基因序列进行比较,结果显示6株毒株同国内毒株MinA株、GXB株、GXW株、Ea株、SH株、LA株核苷酸同源性在97.8～99.0%之间,氨基酸同源性为96.5～99.0%,与国外毒株Rice株核苷酸和氨基酸同源性最低,分别为96.4～97.0%,93.6～95.2%。研究表明,广西PRV同国内毒株亲缘关系密切,变异情况不大;调查显示PR的检出率并不高,说明我区PR的防控工作已初见成效,但调查表明一些规模猪场仍存在PRV隐性感染的情况,这提醒我们PRV防控工作仍不能放松。将筛查出的6份PRV阳性样品进行病毒的分离工作,目前仅分离出一株PRV病毒。该病毒接种家兔后引起典型的奇痒、神经症状,接种PK-15细胞出现典型的细胞病变,病毒效价(TCID50)为10-7.22/0.1ml,PCR扩增出与目的片段大小相符的带,与国内外不同PRV毒株进行分析比较,发现该毒株与其它5株广西毒株及国内MinA株、Ea株、SH株、LA株、GXB株、GXW株核苷酸同源性在98.4%～99.8%之间,氨基酸同源性在97.8%～99.4%之间,与国外毒株Rice株相比,核苷酸和氨基酸的同源性均较低,分别为97.0%和95.2%,结果证实该分离毒为伪狂犬病病毒,命名为GXBB-1株。将该病毒株gE胞外基因作为构建双功能分子的抗原肽部分进行试验。用oligo软件设计构建2E8-gE融合基因的引物,将抗人红细胞H抗原的单链抗体基因2E8同GXBB PRV gE胞外基因,利用SOE PCR方法拼接起来,并回收片段,同PMD18-T simple vector连接,经PCR、测序鉴定成功实现了两段基因的连接,且读码框正确。将重组质粒PMD-2E8-gE进行双酶切（BamHI和EcoRI）,回收2E8-gE片段,并与同样双酶切的表达载体PET-His连接,经双酶切和PCR鉴定成功构建了表达重组质粒PET-His-2E8-gE。为进一步表达2E8-gE蛋白,从而建立PRV快速诊断试剂盒打下了基础。