弹性蛋白酶与激肽释放酶联产工艺的研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq85451619
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胰脏是重要的消化器官,分泌各种用以消化食物的水解酶如弹性蛋白酶、激肽释放酶、淀粉酶及脂肪酶等,同时也分泌一些与代谢有关的重要激素如胰岛素、胰高血汤素等。这些酶或激素大多可作为重要的生化药物为人们所用,因而动物胰脏的综合利用具有很大的经济效益。我国主要从猪胰脏当中提取的生化药物是胰岛素,用完的残渣大都弃之不用,造成了资源上的浪费。本实验就是摸索出一套合适的工艺,从这些残渣当中回收弹性蛋白酶和激肽释放酶,为以后的工业化生产做好准备。弹性蛋白酶和激肽释放酶是以酶原的形式存在于胰脏当中,不具有任何活性,在纯化时必须将它们激活。本文首先考察了影响两酶激活的三个主要因素:pH值、温度和提取时间。最后确定在37℃下,用pH=B的缓冲液提取4小时,可将两酶完全激活,而为了提高收率,应连续进行两次抽提。此外,实验证明,Ca2+、Mg2+对弹性蛋白酶的激活有一定的抑制作用,对激肽释放酶的激活有较小程度的促进作用。在对弹性蛋白酶和激肽释放酶分离纯化时,采用的是离子交换法,第一步粗提使用的是国产离子交换剂AⅡ,经过此离子交换剂后,两酶被分开,弹性蛋白酶先被洗脱下,再经过离子交换剂CⅠ和疏水层析两次纯化后,纯度达到电泳纯,比活为61.05IU/mg,活性收率为69.03%,纯化倍数为10.94倍;激肽释放酶先是被离子交换剂AⅡ所吸附,被洗脱下来后,再经离子交换剂CⅡ和疏水层析两次纯化后,纯度达到电泳纯,比活为71.63IU/mg,活性收率为68.12%,纯化倍数为11.70倍。最后对两酶的部分性质进行了考察,弹性蛋白酶的分子量约为26.0kDa,紫外下的最大吸收波长是276nm;激肽释放酶的分子量约为27.0kDa,紫外下的最大吸收波长是280nm;两酶在37℃下,pH=5.5和6.5时比较稳定,在pH=3.5和8.5时很容易失活。
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