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研究背景及目的:肺炎支原体(Mycoplasma Pneumoniae,MP)是呼吸道感染的最常见病原体之一,是引起社区获得性肺炎(Community Acquired Pneumonia,CAP)的重要病原体,肺炎支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia,MPP)患儿占住院肺炎患儿的14.5%-40%。近些年来MP感染呈现了许多不同以往的特点,如:药物效果差,感染年龄低龄化,新的检测手段的出现。以往认为MP感染多发生与年长患儿,但最近这种年龄特点正在淡化,婴幼儿感染增多。既往认为大环内酯类抗生素对大多数MP感染有效,但近年耐药菌株增多,药物效果变差,重症难治性肺炎支原体肺炎(Refractory Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia,RMPP)的发生率在增高,婴幼儿发生RMPP的情况也在增多。而且MP会在半封闭的环境中,如学校、幼儿园等,发生暴发流行。MP感染临床表现缺乏特异性,易与病毒感染相混淆。因此,早期、准确的检测MP对MPP的诊断和治疗具有重要的临床意义。临床常用的MP检测方法有血清学检测方法、DNA荧光定量扩增和近年出现的荧光恒温扩增技术(Simultaneous Amplification and Test,SAT),近几年国内外的指南都将核酸检测列入了诊断MP感染的病原学依据中。本文对发热门诊就诊的0-14岁儿童进行咽拭子检测,对呼吸科住院的肺炎患儿进行MP培养、DNA荧光定量扩增、RNA恒温扩增,并检测血清MP-IgM水平,同时收集相关临床资料,对结果进行统计分析。了解近期MP感染的临床特征,比较DNA荧光定量扩增和RNA恒温扩增2种核酸检测方法的优劣,探索MP菌量与病情变化的临床相关性,以期为儿科临床医师的诊治提供科学依据。方法:(1)从发热门诊就诊的14岁以下呼吸道感染的儿童中通过入组标准和排除标准确定研究对象,对每个研究对象进行咽拭子采样,进行DNA荧光扩增,并记录相关临床资料及家庭成员的感染情况。(2)从呼吸科住院患儿中通过入组标准和排除标准选择研究对象,于住院当日或第二日采集3份咽拭子进行MP培养、DNA荧光扩增、RNA恒温扩增,并抽取静脉血检测MP-IgM,如果MP培养阳性或其他三种方法中两种方法阳性,视为MP感染。MP感染患儿出院前再次采集3份咽拭子,再次完成上述检测,并记录相关临床资料,探索MP菌量与临床病情的相关性。由于出院前采血困难,所以未对MP-IgM进行二次检测,只对DNA荧光定量扩增、RNA恒温扩增、MP培养3种方法进行了前瞻性纵向比较。二次检测前的评估如下,临床缓解,体温正常,肺部啰音减少或消失,血常规基本正常范围,咳嗽等症状好转。结果:(1)发热门诊有效样本1025例:春季322例,夏季345例,秋季220例,冬季138例。春夏秋冬四个季节的MP检出率有显著性差异(χ~2=28.673,p(27)0.001),夏秋季高于冬春季。春夏秋冬四个季节MP感染患儿在性别、年龄、疾病严重程度方面无显著性差异(p(29)0.05)。1025例有效样本的年龄段分布为:0-2岁392例,2-5岁399例,(29)5岁234例;MP感染患儿共163例年龄分布:0-2岁19例,2-5岁70例,5岁以上74例,0-2岁、2-5岁、(29)5岁三个年龄段的MP感染患儿的数量有统计学差异(χ~2=326.000,p(27)0.001)。(2)共发现40例患儿所在的家庭发生了MP感染的传播,17例患儿传染给了兄弟姐妹,其中16例是年长儿传染年幼儿;16例患儿传染给了家长,经仔细询问患病家长为(外)祖父母及近期因工作频繁熬夜的父亲;7例患儿同时传染给了兄弟姐妹和父母。(3)454例住院患儿入院时DNA荧光定量扩增检出198例,检出率43.61%,RNA恒温扩增检出196例,检出率43.17%,MP培养检出180例,检出率39.65%,MP-IgM检出139例,检出率30.62%,4种方法检出率有统计学差异(χ~2=20.771,p(27)0.001)。(4)209例MP感染患儿在出院前的第二次检测中,MP培养阳性例数148例,阳性率70.81%,14例(6.70%)由阴性转为阳性,46例(22.10%)由阳性转为阴性;RNA恒温扩增阳性例数180例,阳性率86.12%,27例(12.92%)由阳性转为阴性,11例(5.26%)由阴性转为阳性;其余两次检测皆为阳性;DNA荧光定量扩增阳性例数190例,阳性率90.91%,其中4例(1.91%)由阴性转为阳性,12例(5.74%)由阳性转为阴性。RNA恒温扩增和DNA荧光定量扩增第二次检测阳性率均下降,下降的幅度分别为7.66%、3.83%。通过DNA荧光定量扩增定量分析,141例(67.5%)阳性样本在两次检测间MP菌量下降,68例(32.5%)阳性标本菌量增加。结论:(1)本院区就诊的MP感染患儿在夏秋季多于冬春季,5岁以下MP感染患儿较以往增多。(2)MP的传染性与距离相关,同处一个家庭或班级为易感染场景,建议人员密集场所保持社交距离。(3)DNA荧光定量扩增和RNA恒温扩增检出率和准确性均高于MP-IgM和MP培养,且DNA荧光定量扩增和RNA恒温扩增两种方法的检测结果具有高度一致性。(4)MP菌量与患儿病情并不平行。