论文部分内容阅读
随着现代工业技术的飞速发展，释放到自然环境中的危害环境和人类健康的化学品越来越多，人们对这些化学品的警惕性也在不断提高。一类被称为持久性有机污染物（POPs）的物质已成为全球关注的热点问题，因为这类物质具有持久性、易于生物富集，同时它们对人和生物具有免疫毒性、内分泌毒性、“三致”以及其它一些毒性效应，给人们带来越来越多的健康和环境问题。目前对POPs的分析最常用的是色谱、色谱-质谱联用分析技术，这是因为该技术可以分析复杂物质，并且能够获得可靠的结果；但是这些仪器分析法需要贵重的仪器，繁重的样品前处理（纯化、浓缩或者衍生化），大量的有害有机溶剂以及大量的辅助试剂，不利于大量样品的实时分析测定。因此，发展能够对POPs进行快速筛查的生物分析方法具有重要意义。荧光分析及电化学发光分析法都具有很高的灵敏度，被认为是极具应用潜力的新型分析技术。荧光分析法由于其灵敏度高使其成为目前公认的最灵敏的检测方法之一，同时它还具有选择性强，使用简便等优良特点，使得荧光分析法在环境监测及生命科学等领域获得了广泛的应用。免疫分析法具备有效的灵敏度、特异性、快速和低成本的优点；可对大量的样品进行常规分析；能够用于样品的定性筛选，也能够对样品进行定量测定以确定样品中待测组分的含量；免疫检测手段在临床、生物制药和环境化学等领域得到了广泛的应用。电化学发光分析法不仅具有化学发光分析法的线性范围宽、灵敏度高及仪器简单等优点，而且具有电化学分析过程可控性好、选择性强、发光信号易于检测的优点。基于以上现状，本文主要做了以下三方面的研究工作：（1）间接荧光法检测五氯苯酚（PCP）：五氯酚本身不具有荧光性质,建立五氯酚的荧光分析技术具有很大挑战。Ce3+能发射强的荧光而Ce4+没有荧光，PCP能够消耗羟基自由基；试验发现辣根过氧化氢酶（HRP）可以催化氧化过氧化氢（H2O2）产生羟基自由基，同时羟基自由基可以将Ce3+氧化为Ce4+，使得荧光淬灭；当存在目标物PCP时，Ce3+和PCP竞争消耗羟基自由基使得荧光淬灭受到抑制。基于这个现象建立了PCP的间接荧光检测法。该方法不需要复杂的荧光标记反应，其线性范围为1.0×10-81.0×10-4M，检测限为5.0×10-9M。（2）荧光偏振免疫分析（FPIA）检测八氯苯乙烯（OCS）：通过实验室自制抗体，利用以罗丹明B标记的八氯苯乙烯半抗原为荧光标记物（Rhodamine B-hapten），依据荧光标记半抗原与其抗体反应前后荧光偏振程度的不同，用竞争性方法检测溶液中抗原（OCS）的含量。在最优条件下对OCS进行分析检测，其线性范围为0.65650nM，检测下限为0.34nM。该方法比高效液相色谱和气相色谱更加简单快速，同时回收率（﹥90%）。试验表明，该荧光偏振免疫分析法可用用于环境、生物以及农业样品的现场分析检测。（3）电化学发光均相免疫分析检测三（2,3-二溴丙基）异氰脲酸酯（TBC）：利用恒电压阳极氧化法制备孔径均一的二氧化钛纳米管阵列（TiO2NTs）作为工作电极，以鲁米诺标记的半抗原分子为发光物质（luminol-hapten），实验室通过免疫新西兰雄性小白兔自制多克隆抗体；luminol-hapten能发射较强的电化学发光信号，当溶液中存在抗TBC抗体时，通过发生特异免疫反应形成大分子，由于空间位阻效应抑制了电化学反应，使得电化学发光（ECL）信号淬灭，当溶液中存在目标物TBC时由于竞争结合抗体使得ECL淬灭受到抑制，基于这个原理用于检测TBC。实验表明，TBC浓度的对数与ECL抑制效率存在线性关系，线性范围为0.42170nM，检测下限达到了0.2nM并且实验相对标准偏差小于5.5%。该方法结合了ECL发光法高灵敏度和免疫分析法的高选择性使得具有较高的灵敏度和选择性。为了对该方法的实用性进行评估，将该方法用于快速检测并评估浏阳河附近工厂废水出口处的污水中TBC的总量，测得废水出口处TBC的含量为0.53nM,表明该方法可用于现场分析检测TBC。