PINX1负性调节ILF2表达抑制鼻咽癌增殖的机制研究

来源 :南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maamyaayha
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目的明确ILF2在鼻咽癌组织和鼻咽部非癌组织中的表达水平,进一步分析其与鼻咽癌患者临床病理参数之间的联系以及ILF2在鼻咽癌细胞中的功能及相关分子机制。研究内容与方法(1)通过免疫组化实验检测ILF2蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部非癌组织中的表达水平;(2)通过Western blot实验和qPCR实验检测人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中ILF2的表达水平;(3)通过细胞功能实验(MTT、EDU实验、划痕实验、Transwell实验)探究过表达或者干扰ILF2后对鼻咽癌细胞功能的作用;(4)通过Co-IP实验和细胞免疫荧光实验验证ILF2蛋白和PINX1蛋白之间是否存在相互作用;(5)通过Western blot实验验证干扰或过表达ILF2后PINX1的表达是否有变化;(6)通过Western blot实验和qPCR实验验证过表达或者干扰PINX1后,ILF2表达是否有变化。结果免疫组化结果表明,ILF2在鼻咽癌组织中的高表达率77.5%(62/80)远高于非癌对照组20%(9/45)。ILF2蛋白的高表达与鼻咽癌的T分期正相关(P=0.013)。ILF2在鼻咽癌细胞系中表达上调,在鼻咽癌细胞中干扰ILF2表达后肿瘤细胞生长活性和增殖能力明显降低;而过表达ILF2后鼻咽癌细胞的生长活性和增殖能力明显增加。划痕实验和Transwell实验表明,干扰或过表达ILF2对鼻咽癌细胞的侵袭转移能力无影响。Co-IP实验和免疫荧光实验表明在鼻咽癌细胞中PINX1和ILF2蛋白之间存在相互作用。与对照组相比,鼻咽癌细胞中干扰或过表达ILF2后,PINX1的蛋白表达无明显差异。在鼻咽癌细胞中过表达或者干扰PINX1后,ILF2的mRNA表达水平与对照组相比均无明显变化。在鼻咽癌细胞中过表达PINX1后,ILF2的蛋白表达量明显减少。在鼻咽癌细胞中先通过转染特异性siRNA干扰ILF2表达后,再干扰PINX1的表达,与单纯干扰ILF2组相比,同时干扰ILF2和PINX1组,ILF2蛋白表达水平较高。表明PINX1可抑制ILF2的蛋白表达。结论我们首次证明ILF2在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中高表达,ILF2的高表达与鼻咽癌的T分期呈正相关,ILF2可能是鼻咽癌的一个潜在肿瘤生物标志物。进一步分子机制研究中,我们发现ILF2促进鼻咽癌细胞增殖。ILF2蛋白与抑癌基因PINX1蛋白之间存在相互作用。PINX1通过结合ILF2,抑制ILF2的表达,从而抑制鼻咽癌细胞增殖。本研究为鼻咽癌的诊断和治疗提供新思路。
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