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肌松药主要与骨骼肌神经肌肉接头后膜的烟碱型乙酰胆碱受体（m-nAChR）结合，阻断神经肌肉兴奋的传递而使骨骼肌松弛。肌松药在体内的作用受许多因素影响，这也造成不同肌松药作用有较大差异。如能从受体角度研究肌松药的作用，则可能更深入探讨影响肌松药作用的主要原因。本研究目的：在人胚胎肾细胞（HEK293）细胞膜上瞬时表达骨骼肌成人型乙酰胆碱受体（ε-nAChR）和胎儿型乙酰胆碱受体（γ-nAChR）。再应用膜片钳技术研究和对比分别应用罗库溴铵、维库溴铵、阿曲库铵以及复合应用罗库溴铵和维库溴铵或阿曲库铵对骨骼肌细胞膜上ε-nAChR和γ-nAChR的作用。 方法：先将目的基因α，β，δ，γ或ε亚基的cDAN从原核质粒剪切下来，应用连接酶克隆到真核表达质粒pcDNA3.1上。将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，抽提酶切重组质粒及进行基因测序来筛选出阳性重组子，即得到pcDNA3.1α，pcDNA3.1β，pcDNA3.1δ，pcDNA3.1γ和pcDNA3.1ε。以含抗生素的DMEM培养液培养HEK293细胞。用脂质体转染法将含目的基因pcDNA3.1α，pcDNA3.1β，pcDNA3.1δ，及pcDNA3.1γ或pcDNA3.1ε按2：1：1：1比例导入HEK293细胞内。最终在HEK293细胞膜上瞬时表达ε-nAChR和γ-nAChR。再用全细胞膜片钳技术。观察和比较罗库溴铵、维库溴铵、阿曲库铵与这两种受体作用引起的峰电流的变化。以等效浓度比值混合罗库溴铵和维库溴铵或罗库溴铵和阿曲库铵。用等效线图法研究和比较罗库溴铵复合维库溴铵或阿曲库铵对这两种受体作用引起的峰电流的变化。每组数据测定5个细胞。 结果：成功获得瞬时表达ε-nAChR和γ-nAChR的HEK293细胞。经全细胞膜片钳技鉴定，乙酰胆碱只能激动转染含目的基因的HEK293细胞，记录到内向电流。对于无转染的HEK293细胞和转染不含目的基因的质粒（pcDNA3.1）的HEK293细胞，乙酰胆碱均无激动作用，均未观察到电流。罗库溴铵、维库溴铵和阿曲库铵均能竞争性抑制ε-nAChR和γ-nAChR，并呈浓度依赖性。罗库溴铵，维库溴铵、阿曲库铵抑制ε-nAChR的IC50依次为169.21±12.5μM、8.29±2.65μM、24.23±6.51μM；抑制γ-nAChR的IC50依次为8.64±2.56μM、54.97±14.25μM和193.39±39.26μM。对ε-nAChR作用，罗库溴铵复合维库溴铵和罗库澳钱复合阿曲库钱的混合液中各自ICS。交点都位于95%有效区间下方。对Y一nAChR作用罗库嗅按复合维库澳按混合液中二者IC:。交点在95%有效区间之中;而罗库澳钱复合阿曲库按混合液的两者ICS。交点在其95%有效区间的下方。 结论:①成功在HEK293细胞膜表达C-nAChR和YnAChR，这为以后实验奠定基础。②对￡一nAChR抑制作用由强到弱依次为维库溟钱邪可曲库按>罗库嗅钱;对Y一nAChR抑制作用依次为罗库澳铰>维库澳钱邓可曲库钱。③罗库嗅钱与Y一nAChR的亲和力高于维库澳按和阿曲库按;但罗库澳按与￡一nAChR亲和力最小低于维库澳按和阿曲库按。④罗库溟钱与维库嗅钱或阿曲库钱复合对E一nACHR的抑制作用都是协同作用;对Y一nAChR的抑制作用罗库溟钱与维库澳按复合是相加作用，而罗库溟钱与阿曲库按复合对Y一nAChR的是协同作用。