物理诱变剂和化学诱变剂可以快速、有效地诱导突变,因此在微生物育种领域得到广泛应用。通常化学诱变剂诱变效果较好,但它们大多剧毒,甚至致癌;有些物理诱变剂虽然也有较理想的诱变能力,但价格昂贵,使用时对环境也存在一定的辐射危害。超临界CO₂是一种环境友好的溶剂,对微生物具有一定的致死效应。本论文首次尝试以超临界CO₂为诱变剂对脂肪酶产生菌进行诱变处理,希望获得正突变株,以此验证超临界CO₂诱变方法的可行性。首先,从含油土壤中筛选获得一株细菌,发酵24 h产酶活力为16.4u/mL。用全自动微生物鉴定仪快速检测该菌的各项生理生化指标,确定其为黄杆菌,暂命名为Flavobacterium sp.strain YY25。然后,用超临界CO₂对YY25菌株进行诱变处理。主要考察了CO₂压力、温度和处理时间,以及化学添加剂（二甲亚砜、水合肼）对YY25菌株存活率和正突变率的影响,确定最适诱变剂量,分别是8 MPa、35℃、30 min的超临界CO₂和1%的二甲亚砜、0.5%的水合肼。经过诱变、筛选获得一株产酶活力为29.0 u/mL的突变株（YY25-H0.5）,比出发菌株YY25提高76.7%。最后,通过单因素实验、Plackett-Burman实验和响应面实验对YY25-H0.5进行发酵条件优化,产酶活力最高达到38.9 u/mL,是优化前的1.34倍。实验证实,超临界CO₂可作为一种新的环境友好的诱变剂使用。这一研究为遗传育种提供了新的诱变方法,同时也开拓了超临界CO₂应用的新领域。