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背景和目的卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,由于早期缺少特异性的症状和有效筛查手段,大部分患者就诊时已属晚期,其死亡率居妇科肿瘤之首,对女性生命造成严重威胁。近年来,随着医学技术水平的提高,卵巢癌的五年生存率虽有所提高,但仍只有25%-30%。卵巢癌的治疗是以手术治疗为主,辅以化学治疗、放射治疗、免疫治疗等联合治疗,但对晚期卵巢癌患者疗效欠佳。基因治疗和以基因治疗为基础的肿瘤基因-放射治疗是近年来提出的肿瘤治疗的新策略。即刻早期反应基因(immediate early response gene X-1,IEX-1)是即刻早期基因(immediate early gene, IEG)家族成员之一,该基因定位于5q31,其调控序列高度保守,可在受到理化刺激如电离辐射、有丝分裂原、自由基等后,诱导其快速、短暂的表达。IEX-1与细胞生长、分化和凋亡密切相关,并参与多种肿瘤的发生发展。最新研究表明IEX-1在卵巢癌组织中存在低表达,IEX-1的低表达是卵巢良性肿瘤向恶性转变的因素,且IEX-1的低表达与卵巢癌患者的低生存率有关,将重组质粒pEGFP-N1-IEX-1转染低表达IEX-1的人卵巢癌细胞SKOV3, S期+G2/M期细胞比例显著增加,细胞增殖速度加快,体内试验和体外试验均提示IEX-1参与卵巢癌的发生发展。本实验应用紫外线照射方法照射低表达IEX-1的人卵巢癌细胞SKOV3,用脂质体介导的基因转染方法,将重组质粒pEGFP-N1-IEX-1转染SKOV3细胞,观察IEX-1基因的辐射可诱导性和对顺铂化疗敏感性的影响,同时检测卵巢癌组织中IEX-1与NF-κB、Mcl-1、p53的表达情况及其相关性,进一步探讨IEX-1发挥功能的具体机制,为临床以IEX-1为靶点治疗卵巢癌提供依据。方法1.采用不同剂量紫外线照射低表达IEX-1的人卵巢癌细胞SKOV3, RT-PCR方法检测照射后不同时间点SKOV3中IEX-1mRNA的表达变化。2.实验分为三组：SKOV3组、SKOV3-EGFP组和SKOV3-IEX-1组。扩增、提取重组质粒pEGFP-N1-IEX-1和空质粒pEGFP-N1;采用脂质体转染方法将两种质粒分别转染SKOV3细胞,荧光显微镜观察两组的转染效率,Western blot方法检测三组IEX-1蛋白的表达情况。3.采用PI/AnnexinV双染法分析SKOV3组、SKOV3-EGFP组和SKOV3-IEX-1组对顺铂化疗敏感性的变化,分析IEX-1对顺铂化疗敏感性影响。4.采用免疫组织化学SP法检测41例卵巢癌组织中IEX-1与NF-κB.Mcl-1、 p53的表达情况,并分析其相关关系。5.应用SPSS17.O软件进行统计学分析,计量资料多组间均数差异性比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)及bonferroni法检验。以双侧α=0.05为检验水准。结果1.不同剂量紫外线照射低表达的IEX-1的SKOV3细胞后,IEX-1mRNA的表达均明显增加(P<0.05),具有剂量依赖性(P<0.05);其中40mJ/cm2紫外线照射细胞,培养1小时或2小时后IEX-1mRNA表达量最高(P<0.05)。2.脂质体介导的重组质粒pEGFP-N1-IEX-1和空质粒pEGFP-N1转染SKOV3细胞后,荧光显微镜下可见大量荧光,Western blot方法检测SKOV3-IEX-1组细胞中IEX-1蛋白的表达明显高于SKOV3组和SKOV3-EGFP组(P<0.05),而转染空载体组与正常细胞组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3. PI/AnnexinV双染法显示SKOV3-IEX-1组在顺铂作用下细胞凋亡率明显高于SKOV3组和SKOV3-EGFP组(P<0.05),具有浓度和时间依赖性(P<0.05),其余两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。4. IEX-1、NF-κB、 p53、Mcl-1在卵巢癌组织中表达的阳性率分别为36.6%(15/41)、73.2%(30/41)、61.0%(25/41)、56.1%(23/41)；卵巢癌组织中IEX-1与Mcl-1、NF-κB的表达呈负相关(r1=0.322,P<0.05；r2=-0.517,P<0.05),而与p53无相关关系(P>0.05)。结论1.UVB可诱导人卵巢癌细胞SKOV3中IEX-1的表达,具有时间和剂量依赖性。2.IEX-1可在体外增加SKoV3细胞对顺铂化疗敏感性,具有时间和浓度依赖性。3.在卵巢癌中,IEX-1可能通过反作用于其上游调节蛋白NF-κB、抑制Mcl-1的抗凋亡作用,发挥其促凋亡功能。