猪流感（SI）是一种猪的急性呼吸道传染病,是由猪流感病毒（SIV）引起的,各种类型的猪均可感染,临床表现多为高热、咳嗽、他的发病率高、但死亡率低,当与其它病原混合感染时病情加重,死亡率增高,给养猪业造成巨大的经济损失,人也以感染SIV,对人类健康造成很大威胁。SIV的3种亚型H1N1、H1N2、H3N2在猪群中流行最为广泛。其中欧亚类禽型H1N1是我国猪群中广泛流行的优势毒株,因此加强H1亚型SIV的检测十分必要。本研究以欧亚类禽型H1N1 SIV LN225作为免疫原,腹腔接种6周龄BALB/c小鼠,致敏小鼠淋巴细胞,提取脾脏内的致敏淋巴细胞与SP2/0细胞融合形成杂交瘤细胞,通过血凝抑制试验共筛选出6株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1F4、3F6、4E2、5F7、2E8和2E7。亚类鉴定结果证明单克隆抗体3F6、5F7、2E8、2E7的重链是Ig G2a,1F4、4E2的重链是Ig G1,所有单克隆抗体的轻链均为κ链。间接免疫荧光实验表明,6株单抗均能与病毒的HA蛋白发生特异性反应。单抗1F4、3F6、4E2、5F7、2E8和2E7的细胞培养上清及腹水HI效价分别为2⁹、2⁷、2⁶、2⁷、2⁸、2⁴和2¹⁹、2¹⁴、2¹⁴、2¹³、2¹⁴、2¹⁴,但单抗5F7、2E7的腹水与H3亚型抗原有非特异性反应。最后筛选到4株具有较高HI效价且能稳定抗H1亚型的HA单抗1F4、3F6、2E8和4E2。以纯化的猪阳性血清作为捕获抗体,HRP标记单抗3F6作为检测抗体,建立了特异性检测H1亚型SIV的抗原捕获ELISA方法。优化反应条件后,纯化多抗以5.96μg/孔包被ELISA板;包被时间为37℃作用1 h后4℃过夜;5%脱脂乳37℃封闭1 h;待检抗原37℃作用1 h;HRP标记单克隆抗体1∶2000稀释后37℃孵育0.5 h;显色时间室温10 min。通过对30份SIV阴性抗原样品抗原捕获ELISA检测结果进行统计分析,确定判定本方法的标准为>0.069为阳性,<0.063为阴性,介于两者之间为可疑。检测H3、H5、H6、H9亚型SIV无交叉反应,板内板间变异系数均小于10%,敏感性结果显示,比常规HA试验至少敏感16倍。对实验室人工感染的12份脏器组织进行的抗原捕获ELISA检测与鸡胚病毒分离法检测结果比较有较好的符合率,但不如病毒分离敏感。检测了24份H1N1亚型SIV鸡胚尿囊液均为阳性,以上结果表明我们建立的抗原捕获ELISA方法具有较好的特异性和敏感性。利用此方法对采集自江苏省、山东省、天津市、浙江省共546份猪鼻腔拭子临床样品进行检测,共检出3份为H1亚型SIV,说明可以用于临床样品的检测,为H1N1亚型SIV的监测诊断提供了一种快速、简便的方法。