1目的1.1采用miRNA基因芯片筛选并分析缺血性脑卒中（IS）患者和健康人之间存在表达差异的miRNA,并通过RT-q PCR对其中差异明显的miRNA进行验证分析,探索可能与IS相关的miRNA。1.2通过临床研究,观察比较采用通督调神针刺前后IS患者临床疗效与循环miRNA的差异,探讨通督调神针刺发挥临床疗效与调控miRNA表达的关联性。2方法2.1采用miRNA基因芯片分别检测3例IS患者和3例健康受试者血清中的循环miRNA,筛选出表达差异的miRNA,并对结果采用RT-q PCR验证;基于Gene Ontology数据库进行GO显著性富集分析,初步明确相关靶基因功能类;KEGG Pathway为单位进行Pathway显著性富集度分析,初步明确相关靶基因生物学路径。2.2采用随机对照临床试验方法,60例IS患者将随机被分为通督调神组（30例）和非经非穴组（30例）。在常规治疗的基础上,通督调神组针刺百会、风府、哑门、颈夹脊穴、大椎、身柱、神道、至阳、命门、腰阳关。非经非穴组针刺部位为在通督调神组穴的基础上旁开1寸取穴,若旁开1寸仍是经穴,则再次旁开1寸,不足1寸的取0.5寸。两组患者每周针刺6次,休息一天继续针刺,连续治疗2周/疗程,共观察2个疗程。观察记录两组患者治疗前（第0周）,与治疗后（第4周）NIHSS量表和ADL量表的评分;采用RT-q PCR法检测上述两组患者接受治疗前后的3个血清循环miRNA的表达情况,再通过SPSS相关性分析探讨通督调神针刺发挥临床疗效与调控miRNA表达的关联性。3结果3.1采用基因芯片检测IS患者与健康受试者血清中循环miRNA差异性表达:与健康受试者比较,IS患者血清中有55个miRNA存在着显著差异表达（Fold Change差异表达倍数≥1.2,校正P≤0.05）,其中差异表达上调的miRNA有25个,差异表达下调的miRNA有30个;筛选出的25个上调的差异表达miRNA靶基因功能主要富集在生物学过程中的细胞过程正调控、细胞代谢过程正调控、解剖结构形态发生等,细胞成分中的突触、细胞连接、细胞质和细胞器结合膜等,分子功能的蛋白质结合DNA结合转录激活活性和分子功能调节等;筛选的30个下调的差异表达miRNA靶基因功能主要富集在生物学过程中RNA聚合酶Ⅱ对转录的调节、大分子代谢过程的正调控和RNA代谢过程的调节等,细胞成分中的细胞内、细胞连接、核染色质和细胞器膜,分子功能的RNA聚合酶II转录调节区序列特异性DNA结合、DNA结合转录因子活性,RNA聚合酶II特异性等（P≤0.05）;筛选出的25个上调的差异表达miRNA靶基因显著富集于细胞衰老、PI3K-Akt信号通路、Notch信号通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等通路,筛选的30个下调的差异表达miRNA靶基因功能主要富集于Fox O信号通路、寿命调节途径、细胞衰老、PI3K-Akt信号通路、醛固酮合成与分泌等信号通路（P≤0.05）。选择其中差异最显著的、表达较稳定的4个miRNA:hsa-miR-520c-3p、hsa-miR-6827-5p、hsa-miR-4772-5p和hsa-miR-552-3p进行RT-q PCR验证;验证结果提示,IS患者hsa-miR-520c-3p表达显著升高（P<0.05）、hsa-miR-4772-5p和hsa-miR-552-3p表达显著降低（P<0.05）,表达趋势与基因芯片结果相符合。3.2针刺干预IS患者的临床疗效观察:两组纳入患者的人口学资料（性别,年龄,受教育水平）,病程,卒中部位和既往史（高血压病,糖尿病,高脂血症）均在统计学上无明显差异（P>0.05）,具有可比性。两组间治疗前比较（P=0.198037（29）0.05）,差异无统计学意义,表明两组之间具有可比较性;两组内治疗前后比较,P（27）0.05,有显著性差异,提示两种治疗方式均能够降低NIHSS评分;对两组治疗前后的NIHSS评分差值进行组间比较,与非经非穴组比较,通督调神组治疗前后NIHSS评分差值较高（P=0.000113（27）0.05）,有显著性差异,提示通督调神组NIHSS评分降低更加显著。两组间治疗前比较P=0.524337（29）0.05,差异无统计学意义,表明两组之间具有可比较性;两组内治疗前后比较,P（27）0.01,有显著性差异,提示两种治疗方式均能够升高ADL评分;对两组治疗前后的ADL评分差值进行组间比较,与非经非穴组比较,通督调神组治疗前后ADL评分差值较高（P=0.001149（27）0.05）,有显著性差异,提示通督调神组ADL评分升高更加显著。3.3针刺对IS患者血清中循环miRNA水平的调控情况:接受治疗前通督调神组和非经非穴组的各miRNA表达无显著性差异,具有可比性;接受治疗后,与本组治疗前相比,通督调神组和非经非穴组hsa-miR-520c-3p表达降低,具有显著性差异;hsa-miR-4772-5p和hsa-miR-552-3p表达升高,具有显著性差异。接受治疗后,与非经非穴组相比,通督调神组hsa-miR-520c-3p的表达显著降低,hsa-miR-4772-5p和hsa-miR-552-3p的表达显著升高。3.4针刺干预IS患者的临床疗效与调控循环miRNA水平的关联性分析:接受治疗后,通督调神组卒中临床效应指标与miRNA表达情况进行逐一Paerson相关性分析,结果表明,hsa-miR-520c-3p与NIHSS量表呈强度正相关（P（27）0.05）,hsa-miR-520c-3p与ADL量表呈强程度负相关（P（27）0.05）;hsa-miR-552-3p与NIHSS量表呈弱等程度负相关（P（27）0.05）;hsa-miR-552-3p与ADL量表呈中等程度正相关（P（27）0.05）;接受治疗后,非经非穴组患者卒中临床效应指标与miRNA表达情况进行逐一Paerson相关性分析,结果表明,hsa-miR-520c-3p、hsa-miR-4772-5p和hsa-miR-552-3p与各临床效应指标无相关（P（29）0.05）。4结论4.1 IS患者外周血液中存在着异常表达的miRNA,这些异常表达的miRNA可能与调控血管新生相关的PI3K-Akt信号通路、Notch信号通路和MAPK信号通路等有关,伴随着IS的发生发展与康复。4.2通督调神针刺可显著改善IS患者NIHSS量表和ADL量表的评分情况,减轻IS患者神经功能缺损情况,提高IS患者的生活质量,这可能是与通过下调hsa-miR-520c-3p表达和上调hsa-miR-552-3p表达有关。