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著名针灸家谢锡亮在60多年的实践中,发现直接灸法在原发性肝癌(Primary hepatocellular carcinoma, HCC)的预防及放化疗后的免疫康复上疗效显著。相关文献表明,艾灸可减缓HCC癌前病变的形成,缩小肿瘤结节。因此本课题组拟直接灸疗肝俞穴,对HCC癌前病变大鼠进行不同疗程的预防灸治,以研究大鼠在造模过程中,直接灸肝俞穴对癌细胞生长的影响,据此深入探究直接灸防治HCC的时效关系、作用机理,解决直接灸法抑制肿瘤细胞生长的关键问题。研究目的本实验以二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine, DEN)化学诱导法建立HCC大鼠模型,在造模不同时段以直接灸“肝俞”对大鼠进行干预,观察直接灸法对HCC癌前病变大鼠肝脏肿瘤标记物血清甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein, AFP)、肝脏组织形态、细胞凋亡抑制因子Livin在肝脏组织中表达的影响,通过对HCC癌前病变大鼠防治作用的评价从而探讨其作用机制。实验方法将60只Wistar雄性大鼠,分为4组,正常组(10只)、模型组(20只)、预防1组(15只)、预防2组(15只)。除正常组外,其他三组均以DEN逐步诱导建立HCC模型,为期12周即84天。预防1组、预防2组从造模开始即给予肝俞穴麦粒灸,5壮／穴,0.5mmg／壮,隔日一次,分别持续一疗程(10次,20天)与两疗程(20次,40天),预防结束后继续造模至第12周。于造模开始前、预防第一疗程结束时、预防第二疗程结束时、造模结束时四个时间点分别以ELISA法检测血清AFP含量变化；造模结束时处死大鼠后取材,光镜下观察肝脏组织病理变化、免疫组化法检测凋亡抑制因子Livin在肝脏组织中的表达情况。记录结果并作相应统计学处理。实验结果1造模前,各组大鼠血清AFP含量组间比较P>0.05,说明各组间无显著性差异,均衡可比。2预防第一疗程结束时,模型组AFP含量与正常组比较显著升高(P<0.01)；预防1组AFP与模型组比较显著降低(P<0.05)；预防第二疗程结束时,模型组AFP含量与正常组比较显著升高(P<0.05)；预防2组AFP与模型组比较有降低趋势,但末显示明显差异(P>0.05)；造模结束时,模型组AFP含量与正常组比较显著升高(P<0.01)。3模型组肿瘤灶诱导形成,癌变细胞深染；预防1组癌细胞数量少,没有结节形成；预防2组肝脏保持正常组织形态,癌细胞仅限于中央静脉周围。4造模结束时,模型组、预防1组与预防2组均可见有Livin阳性表达(肝细胞膜黄染)。与正常组比较,模型组累计光密度IOD值显著升高(P<0.01)；与模型组比较,预防1组、预防2组IOD值均显著降低(P<0.01,P<0.05)；预防1组与预防2组比较IOD值未显示有差异(P>0.05)。实验结论1直接灸肝俞穴可以降低大鼠肝脏肿瘤标记物血清AFP含量,减轻大鼠肝细胞癌变程度以及凋亡抑制因子Livin在肝脏组织中的表达。2直接灸法对改善HCC癌前病变大鼠的肝脏损伤有一定作用,其作用机制可能与艾灸增强肝细胞自我修复功能、降低凋亡抑制因子Livin的表达从而抑制肝癌细胞生长、促进其调亡,使肝癌结节缩小、数目减少有关。