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目的：观察氧化应激在卵巢癌TRAIL耐受中的作用,探讨调控氧化应激能否逆转TRAIL耐受,为顺铂耐药性卵巢癌提供一个重要的治疗思路。方法：第一部分：1)细胞活力检测：采用不同浓度TRAI L处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞,恒温培养箱孵育48小时,使用全自动酶标仪(波长490 nm)检测吸光度,记录并分析数据,绘制不同药物浓度下细胞的活力曲线。2)细胞凋亡检测：将SKOV3 和 SKOV3/DDP细胞分别用含500ng/ml TRAIL按照指定的时间培养,流式细胞术检测细胞凋亡。第二部分：1)顺铂联合TRAIL对SKOV3细胞活力与凋亡的影响：不同浓度顺铂预处理SKOV3细胞1小时,再伴随使用或不用TRAIL (500ng/ml)处理24小时后,采用MTT法检测细胞活力,并采用流式细胞技术检测细胞凋亡程度;2)ROS水平检测：用不同浓度顺铂和H202分别处理卵巢癌细胞1小时,经DCFH-DA染色后,采用流式细胞仪测量细胞内ROS水平；3)H2O2联合TRAIL对SKOV3细胞活力与凋亡的影响：采用不同浓度的H202预处理SKOV3细胞1小时,在伴随使用或不用TRAIL (500ng/ml)处理24小时后,采用MTT法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡程度。第三部分：1)调控氧化应激对SKOV3细胞TRAIL耐受的逆转：采用NAC (0mM、10mM)预处理SKOV3细胞1小时后,再用顺铂(1μM)或H2O2 (0.1 mM)处理1个小时,接着TRAIL (500 ng/ml)处理细胞24小时。经DCFH-DA染色后,采用流式细胞仪测量细胞内ROS水平,采用MTT’法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡。2)调控氧化应激对SKOV3/DDP细胞TRAIL耐受的逆转：采用NAC (0mM、10mM、40 mM)预处理SKOV3/DDP细胞1小时,在伴随用或不用TRAIL (500 ng/ml)处理24小时后,经DCFH-DA染色后,采用流式细胞仪测量细胞内ROS水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：一部分：1)不同浓度的TRAIL (0、10、50、100、250、500、1000 ng/ml)处理SKOV3或SKOV3/DDP细胞48小时,检测细胞活力。在相同TRAIL浓度处理下,细胞活力在SKOV3/DDP细胞中显著高于SKOV3细胞(P<0.01、P<0.001)。2)用TRAIL (500 ng/ml)处理SKOV3或SKOV3/DDP细胞,作用不同时间(0、6、12、24、48小时),检测细胞凋亡。在相同时间组内,SKOV3/DDP细胞的凋亡水平显著低于SKOV3细胞(P<0.01、P<0.001)。二部分：1)用不同浓度的顺铂(0μM、1μM、10μM预处理SKOV3细胞1小时,伴随使用TRAIL (500ng/m 1)处理24小时,未用TRAIL处理组作为阳性对照。检查细胞活力,结果显示,相比TRAIL组,用高浓度顺铂预处理后细胞活力显著降低,而用低浓度顺铂预处理后细胞活力显著增加(37.67+1.18%,125.11±6.29%VS87.15±11.20%, P<0.001)。在相同培养条件下,检测细胞凋亡结果显示,高浓度的顺铂协助TRAIL诱导细胞凋亡,而低浓度顺铂则抑制TRAIL诱导细胞凋亡(63.15+4.42%,5.55±1.78%VS17.90±2.66%,P<0.001,P<0.01)2)用不同浓度的顺铂(0μM,1 μM、10 μM) 或H2O2 (0mM、0.1mM、1mM)处理SKOV3 或 SKOV3/DDP细胞1小时,测量细胞内ROS水平。SKOV3/DDP细胞内的ROS水平显著高于SKOV3细胞(193.6±8.2VS23.7±3.2, P<0.001),且SKOV3 和 SKOV3/DDP细胞内的ROS水平随着顺铂和H202浓度的增加而增加(P<0.001,P<0.01)。3)用H2O2(0mM、0.1mM、1mM)预处理SKOV3细胞1小时,伴随使用TRAIL (500 ng/ml)处理24小时,未用TRAIL处理组作为阳性对照。检查细胞活力,结果显示,相比TRAIL组,用高浓度H202预处理后细胞活力显著降低,而用低浓度H202预处理后细胞活力显著增加(81.35±5.11%,142.72±5.33%VS87.15±11.20%, P<0.05, P<0.001)。在相同培养条件下,检测细胞凋亡,结果显示,高浓度的H202协助TRAIL诱导细胞凋亡,而低浓度H202则抑制TRAIL诱导细胞凋亡(56.69±4.35%,6.25±1.47%VS18.11±2.18%, P<0.001, P<0.01)。三部分：1)用NAC(0mM、10mM)预处理SKO V3细胞1小时,然后用顺铂(1μM)或H2O2(0.1 mM)处理1小时,再用TRAIL (500 ng/m 1)治疗24小时。测量细胞内ROS水平,NAC(10mM)预处理后,H2O2(0.1 mM)+TRAIL组和顺铂(1μM)+TRAIL组的ROS水平显著降低(27.6±5.8VS87.5±6.5,26.3±5.3VS89.6±5.3,P<0.001)。在相同培养条件下,检查细胞活力,NAC(10mM)预处理后,H2O2(0.1 mM)+TRAIL组和顺铂(1μM)+TRAIL组的细胞活力显著降低(78.56±3.21%VS142.72±5.33%,76.25±7.24%VS125.18±6.63%,P<0.001)。检查细胞凋亡,发现NAC(10 mM)预处理后,H2O2(0.1 mM)+TRAIL组和顺铂(1HM)+TRAIL组的凋亡水平明显增加(38.83±11%VS6.54±1.38%,P<0.01；33.13±10.6%VS6.58+1.57%,P<0.05)。2)采用NAC(0mM、10 mM、40 mM)预处理SKOV3/DDP细胞1小时,伴随使用TRAIL (500 ng/ml)处理24小时,未用TRAIL处理组作为阳性对照,检查细胞内ROS水平。发现NAC(10mM)预处理后,对照组和TRAIL组的ROS水平明显降低(170.0±5.6VS190.5+7.2；184.0±4.5VS203.0±3.2, P<0.01)。当NAC浓度增加至40 mM,能进一步降低细胞内的ROS水平,NAC (40 mM)组中ROS水平相比对照组被抑制了74.8±4.5%(P<0.001), NAC (40 mM)+TRAIL组中ROS水平相比TRAIL组被抑制了70.5±3.8%(P<0.001)。在相同培养条件下,检测细胞凋亡,发现NAC(10mM)+TRAIL组凋亡水平高于TRAIL组,但差异无统计学意义(5.75±2.67%,3.77±1.59%,P>0.05),而NAC(40mM)+TRAIL组凋亡水平显著高于TRAIL组,差异具有统计学意义(51.83±6.53%,3.77±1.59%,P<0.001)结论：一部分：SKOV3/DDP细胞存在TRAIL耐受。二部分：低浓度顺铂诱导产生的适度氧化应激有助于SKOV3细胞中TRAIL耐受的产生。三部分：调控氧化应激可逆转SKOV3 和 SKOV3/DDP细胞中的TRAIL耐受。