线粒体动力相关蛋白Drp1在七氟醚后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

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目的①通过对SD大鼠心肌缺血组织内线粒体动力相关蛋白Drp1-mRNA和线粒体动力相关蛋白Drp1含量测定,观察线粒体动力相关蛋白Drp1在七氟醚后处理对大鼠心肌缺血再灌注保护中的作用。②通过在电镜下观察心肌缺血区细胞线粒体形态和结构,探讨线粒体的分裂-融合作用在七氟醚后处理对心肌缺血再灌注保护中的作用。方法雄性清洁SD大鼠40只,体重220~280g,用随机数字表法,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)仅开胸暴露大鼠心脏30min,在左冠状动脉前降支下穿线不结扎;心肌缺血再灌注组(I/R组)采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120min;七氟烷后处理组(S-Post组)再灌注前10min吸入2.4%七氟醚15min;七氟烷后处理+5-羟基癸酸盐组(S-Post+5-HD组)再灌注前10min吸入2.4%七氟醚15min同时尾静脉注射5-HD;七氟醚+二甲基亚枫组(S-Post+DMSO组)再灌注前10min给予2.4%七氟醚15min同时尾静脉注射等量二甲基亚砜。于再灌注120min时,剪下心脏,在冰皿上将部分缺血区心肌分离。将一部分缺血区心肌固定在4%甲醛,HE染色,在显微镜下观察缺血区心肌组织病理学改变;检测缺血区心肌组织中Drp1含量;将部分缺血区心肌保存到-70℃冰箱,用实时定量PCR检测缺血区心肌Drp1-mRNA;部分缺血区心肌固定在2.4%戊二醛中,透视电镜下观察缺血区心肌细胞内的纤维排列是否整齐及线粒体形态结构。结果①光镜下S组细胞结构正常,S-Post组和S-Post+DMSO组细胞破坏和组织结构破坏比I/R组和S-Post+5-HD组明显减轻。②与S组比较,其余4组线粒体动力相关蛋白Drp1表达均增加(P<0.05),线粒体分裂增加,细胞内肌纤维排列紊乱;与I/R组和S-Post+5-HD组比较,S-Post组、S-Post+DMSO组,线粒体动力相关蛋白Drp1表达均减少(P<0.05),线粒体分裂减少,线粒体破坏减少,细胞内肌纤维排列稍整齐;I/R组和S-Post+5-HD组比较,线粒体动力相关蛋白Drp1表达无差别(P<0.05),线粒体破坏、肌纤维紊乱程度相同;S-Post组和S-Post+DMSO组比较,线粒体动力相关蛋白Drp1表达无差别(P<0.05),对线粒体和肌纤维的紊乱程度都较轻。结论①七氟醚后处理可以减轻心肌缺血再灌损伤。②七氟醚后处理可以减少心肌缺血区线粒体动力相关蛋白Drp1表达。③七氟醚后处理可以减少线粒体分裂和破坏,增加线粒体融合,减轻缺血区细胞内肌纤维破坏。
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