论文部分内容阅读
第一部分AFP-shRNA载体扩增,鉴定及Huh肝癌细胞的培养目的：AFP-shRNA质粒载体的扩增鉴定及Huh肝癌细胞的培养。方法：培养细菌,使用axygen试剂盒获取质粒载体。使用分光光度仪测质粒的OD值,电泳测试质粒的完整性。贴壁培养人肝癌细胞Huh细胞系,胰酶消化后传代,进行细胞扩增,适当进行细胞冻存。进行转染实验,并行RT-PCR及扩增产物进行测序验证。结果：使用分光光度仪测OD260/280=1.91,电泳结果条带清晰。人肝癌细胞Huh细胞系培养良好。转染结果经RT-PCR检测有目的基因表达,测序的结果正常。结论：成功获取AFP-shRNA质粒。Huh是一个生长速度快,代谢旺盛的肿瘤细胞系。成功将目的基因转入肝癌细胞内。第二部分AFP-shRNA联合丝裂霉素对Huh肝癌细胞的影响目的：研究AFP-shRNA联合丝裂霉素对Huh肝癌细胞的影响方法：转染48小时后检测细胞上清液中ALT, AST, AFP的浓度,CCK-8检测细胞的增值情况,通过流失细胞仪检测细胞凋亡情况结果：转染48小时后各组上清液ALT, AST, AFP总体相比P小于0.05,有统计学差异,各组两两相比,联合组与AFP组、丝裂霉素组、空白组相比P<0.05,有统计学差异,AFP组与丝裂霉素组相比无统计学差异,各组细胞凋亡总体相比P<0.05,有统计学差异,联合组分别与AFP组、丝裂霉素组、空白组相比P均小于0.05,有统计学差异；各组细胞增殖情况总体相比P<0.05,有统计学差异,联合组与AFP组、空白组、丝裂霉素组相比P<0.05,有统计学差异,AFP组与丝裂霉素组P>0.05无统计学差异；结论：1AFP-shRNA可以抑制AFPmRNA表达,促进肝癌细胞凋亡。2AFP-shRNA联合丝裂霉素处理肝癌细胞可以抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。