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抗生素是一类能在低微浓度下杀死微生物或抑制它们生长的化学物质,广泛用于预防和治疗人畜的各种感染疾病。然而,抗生素在使用过程中能产生选择作用,提高病原微生物的耐药性。四环素作为一种广谱类抗生素,是目前禽畜养殖业中使用量最大的抗生素之一。据相关研究,禽畜粪便已成为环境中四环素耐药菌和耐药基因的主要来源。进入到环境中的四环素耐药菌和耐药基因能促进耐药基因在环境中的分布和转移,改造甚至恶化其中的微生物生态系统,也给人类带来潜在的威胁。四环耐药基因的污染问题已经日益严重。本研究采用传统微生物培养技术和现代分子生物技术研究了禽畜养殖场禽畜粪便、堆肥和土壤中耐四环素乳糖发酵型肠杆菌(TR-LFE)的比例以及乳糖发酵型肠杆菌(LFE)四环素耐药基因(tet-R)的分布和多样性,并对相关样品中的四环素耐药基因进行了定性和定量检测,以了解本地区动物养殖场中细菌的耐药性能和四环素耐药基因的分布情况。研究结果显示,猪粪便中的耐四环素乳糖发酵型肠杆菌(TR-LFE)的比例在25.00%～66.87%之间；养猪场土壤中TR-LFE的比例为：8.56%～11.51%；堆肥鸡粪中的TR-LFE的比例为：12.17%～13.45%,新鲜鸡粪中比例为4.86%-8.01%。不同的样品中的比例呈现很大的差异性。在449株乳糖发酵型肠杆菌中,共检测到255株含有tet-R基因,占56.79%。各样品乳糖发酵型肠杆菌tet-R基因的检出率范围为3.12%～96.87%。猪粪便中的乳糖发酵型肠杆菌(LFE)携带tet-R基因的概率在78.12%～96.87%之间,数值最大；而新鲜鸡粪(12.90%～62.07%)次之,养猪场土壤(25.00%～46.88%)和堆肥鸡粪(3.12%～30.56%)更少。根据检出频率的大小,各类tet-R基因的排列顺序为：tet(A), tet(B), tet(M), tet(G), tet(C), tet(D), tet(S)。所有样品都没有检测到核糖体保护蛋白编码的tet(O)和编码灭活酶的tet(X), tet(A)和tet(B)是所有样品中乳糖发酵型肠杆菌中检出率最大的tet-R基因。各个样品中乳糖发酵型肠杆菌(LFE)携带多重tet-R基因多为外输泵基因：tet(A), tet(B), tet(C), tet(D), tet(G),其中tet (A)和tet (B)是组成多重耐药基因的主要基因。大部分检测到带多重基因的LFE都来自公猪猪粪和母猪猪粪。在检测的公猪猪粪、母猪猪粪、养猪场土壤、新鲜鸡粪和堆肥鸡粪中,猪粪样品中的LFE检测到的tet-R基因的种类最多,堆肥鸡粪次之,养猪场土壤和新鲜鸡粪样品最少。从9月份到1月份各个样品中乳糖发酵型肠杆菌(LFE)含有的各种tet-R基因的检出率呈下降趋势。样品中总DNA的tet-R基因的多样性远远多于乳糖发酵型肠杆菌tet-R基因的多样性,检测的9种tet-R基因中,最少的养猪场土壤中检测到6种基因,比新鲜猪粪耐药基因的多样性少。其他样品中tet-R基因的检出率都很高。tet-R基因的出现情况并不随着季节的改变改变。根据tet (A)的定量检测,公猪猪粪和母猪猪粪的tet (A)基因含量最多,为103～104 copies/ng DNA,养猪场土壤和新鲜鸡粪样品中tet(A)基因含量次之,为102～103 copies/ng DNA。堆肥鸡粪中tet (A)基因的量最少,明显少于猪粪样品中的。无法从各样品tet-R基因的定量结果得出季节性变化的趋势。